[发明专利]一种胆固醇含量检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种胆固醇含量检测试剂盒，其特征在于，包括如下试剂：氢氧化钾乙醇溶液、正己烷水溶液、Triton X-100异丙醇溶液、溶液A、胆固醇氧化酶溶液、氧化镨溶液和荧光标记DNA探针溶液；其中，所述溶液A包含缓冲液。

2.根据权利要求1所述的胆固醇含量检测试剂盒，其特征在于：所述溶液A还包括氯化钠。

3.根据权利要求1或2所述的胆固醇含量检测试剂盒，其特征在于：所述荧光标记DNA探针为5’端用FAM标记的腺嘌呤五聚体，所述腺嘌呤五聚体的序列为5’-AAAAA-3’。

4.根据权利要求1或2所述的胆固醇含量检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为Hepes缓冲液或醋酸缓冲液。

5.根据权利要求1或2所述的胆固醇含量检测试剂盒，其特征在于：所述氢氧化钾乙醇溶液的浓度为7-10mmol/L；所述正己烷水溶液中正己烷的体积百分比为60%-70%；所述Triton X-100异丙醇溶液中Triton X-100的体积百分比为30%-50%；所述溶液A中缓冲液的浓度为5-20mmol/L，pH为7-8；所述胆固醇氧化酶溶液的浓度为2-10mg/mL；所述氧化镨溶液的浓度为16-166mmol/L；所述荧光标记DNA探针溶液的浓度为5-10nmol/L。

6.根据权利要求5所述的胆固醇含量检测试剂盒，其特征在于：所述溶液A中氯化钠的浓度为30-200mmol/L。

7.一种非诊断目的的胆固醇含量检测方法，其特征在于，使用权利要求1-6任一项所述的胆固醇含量检测试剂盒进行检测，包括如下步骤：

血清样品预处理：向待测血清样品中加入氢氧化钾乙醇溶液以水解血清样品中的胆固醇酯；加入正己烷水溶液进行提取，并对提取液进行分离，得到血清样品提取物；用TritonX-100异丙醇溶液溶解血清样品提取物，得到预处理后的血清样品；

配制胆固醇标准溶液和加标血清样品：用溶液A配制系列浓度的胆固醇标准溶液；用溶液A将预处理后的血清样品稀释500倍，取稀释后的血清样品分别加入到系列浓度的胆固醇标准溶液中，得到系列加标血清样品；

配制检测剂：将氧化镨溶液与荧光标记DNA探针溶液混合，二者反应后得到检测剂；

采用标准加入法测量胆固醇含量：将系列浓度的胆固醇标准溶液以及系列加标血清样品，分别与胆固醇氧化酶溶液混合，置于黑暗条件下温育，向各混合液中分别加入检测剂，得到系列空白标准检测样品和系列加标检测样品；对系列空白标准检测样品和系列加标检测样品分别进行荧光强度检测，分别绘制得到空白标准曲线和加标标准曲线；根据空白标准曲线和加标标准曲线，采用曲线延长法计算获得待测血清样品中胆固醇含量。

8.根据权利要求7所述的非诊断目的的胆固醇含量检测方法，其特征在于：血清样品预处理步骤中，待测血清样品、氢氧化钾乙醇溶液、正己烷水溶液、Triton X-100异丙醇溶液的体积比为1:9:30:1；水解胆固醇酯时，在37℃下振荡进行，水解时间为1h；对提取液进行分离的具体步骤为：在5000rpm下对提取液离心处理5min，离心后取上清液，将上清液置于氮气气流下蒸干溶剂。

9.根据权利要求7所述的非诊断目的的胆固醇含量检测方法，其特征在于：配制系列加标血清样品时，稀释后的血清样品与胆固醇标准溶液的体积比为2:3；配制检测剂时，所述氧化镨溶液和荧光标记DNA探针溶液的体积比为3:2，反应时间为30min。

10.根据权利要求7所述的非诊断目的的胆固醇含量检测方法，其特征在于：采用标准加入法测量胆固醇含量步骤中，制备系列空白标准检测样品时加入的胆固醇标准溶液、胆固醇氧化酶溶液和检测剂的体积比为1:1:25，制备系列加标检测样品时加入的加标血清样品、胆固醇氧化酶溶液和检测剂的体积比为1:1:25；制备系列空白标准检测样品和系列加标检测样品时，在黑暗条件下温育时间为1h；系列空白标准检测样品和系列加标检测样品在进行荧光强度检测前，需室温静置1h；进行荧光强度检测的具体步骤为：在485 nm 激发波长下收集502-700 nm的荧光光谱。