[发明专利]含猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及制备方法和应用

说明书

本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以GP67信号肽‑gB‑His标签或GP67信号肽‑gB‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和XbaI与HindIII之间酶切位点处；所述gB为编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白制备单亚基疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。

技术领域

本发明属于兽用疫苗技术领域，具体涉及含猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及制备方法和应用。

背景技术

猪伪狂犬病(Pseudorabies，PR又名Aujeszky's disease，AD)是由猪伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus，PRV)引起的一种传染病。除各种年龄的猪、牛都易感外，在自然条件下使羊、犬、猫、兔、鼠、水貂、狐等动物感染发病，容易给畜牧养殖业引起较大的经济损失。猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)又称猪疱疹病毒Ⅰ型、传染性延髓麻痹病毒、奇痒症病毒、奥叶兹基氏病病毒，容易引起牛、羊、猪、犬和猫等多种家畜和野生动物发热、奇痒(猪除外)及脑脊髓炎等症状。由于本病的临床症状类似狂犬病，故用了伪狂犬病这一病名。

猪伪狂犬病病毒的感染特点包括两种，一种是潜伏感染，另外一种为隐性感染。潜伏感染是被感染猪不表现临床症状，但感染性病毒却能在猪体内长期以潜伏状态存在，也分离不到病毒，但用聚合酶探针方法可查出病毒基因组DNA的存在，在外界不良环境刺激等造成的免疫力减弱时，潜伏状态的病毒可转化为具有感染性的病毒。隐性感染是在猪群使用疫苗接种或自然感染部分少量病毒后，该猪只得到部分免疫，可发生隐性感染猪和表现为亚临床症状的猪，这种带毒猪排毒可持续一年以上。针对猪伪狂犬病毒的感染特点，现已尝试用改良减毒活疫苗和灭活疫苗免疫来控制猪的疾病暴发。减毒活疫苗通常具有长期免疫效果，但存在衰减不足和遗传不稳定的风险。灭活疫苗不如减毒疫苗有效，同时需要重复接种，大大增加灭活疫苗的使用量。目前还没有出现携带PRV单个基因的亚单位疫苗。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，所述载体促进猪伪狂犬病病毒gB蛋白的分泌表达。

本发明的目的还在于提供了一种表达猪伪狂犬病病毒gB蛋白或gB-IgGFc融合蛋白的重组杆状病毒，所述病毒具有分泌表达gB蛋白或gB-IgGFc融合蛋白的特点。

本发明的目的还在于提供一种用于猪伪狂犬病的亚单位疫苗，所述亚单位疫苗不仅安全性高，而且具有特异性强，免疫性高效等特点。

本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以GP67信号肽-gB-His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和XbaI与HindIII之间酶切位点处；

所述gB为编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因；所述编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gB-IgGFc融合蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以GP67信号肽-gB-IgGFc融合蛋白-His标签为外源基因分别插入BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和XbaI与HindIII之间酶切位点处；

所述gB-IgGFc融合蛋白的核苷酸序列为编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因和IgGFc蛋白的编码序列通过连接序列顺序连接得到；所述编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述IgGFc蛋白的编码序列的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。