[发明专利]一种提高果蝇寿命基因表达量的处理方法及验证方法

说明书

本发明涉及果蝇基因表达量处理技术领域，尤其是一种提高果蝇寿命基因表达量的处理方法及验证方法。处理方法包括：(1)桑黄子实体的获得；(2)桑黄水体液的制备；(3)冷冻干燥；(4)配置母液；(5)稀释；(6)倒入培养基，加酵母粉；(7)收集处女果蝇；(8)培养；(9)及时更换培养基。验证方法包括骤：(1)培养；(2)收集果蝇样品；(3)RNA提取；(4)cDNA反转录；(5)qPCR基因验证。本发明的方法简单快捷、效果明显，能提高与果蝇寿命有关基因的表达量，且不需要昂贵的仪器设备，具有省时简便、成本低的优点。本发明对延长人的寿命有重要的参考价值，并对丰富桑黄的药用价值、延长寿命提供了理论基础。

技术领域

本发明涉及果蝇基因表达量处理技术领域，具体领域为一种提高果蝇寿命基因表达量的处理方法及验证方法。

背景技术

果蝇作为一种重要的模式生物，具备繁殖力强、世代周期短、变异类型多且饲养简单等特点。目前它已被广泛用于生命科学的各个研究领域。尤其是果蝇大约75％与人类疾病同源的基因和代谢途径与人类十分相似，而作为研究衰老和衰老相关疾病的模式生物。衰老是机体组织、器官功能随年龄增长而发生的退行性变化，是机体各种生化反应的综合表现，是体内外许多因素(遗传、精神紧张、心理、社会、环境污染等)共同作用的结果，其机制涉及神经、内分泌、免疫等多方面的改变。关于衰老的理论有多种，包括自由基理论、体细胞突变理论、端粒缩短理论等，其中自由基理论是最有代表性的衰老学说之一。

许多方面的研究证明了抗衰老的根本目的在于尽可能的延长寿命，并在此基础上提高生命活力，故国内外均将细胞和整体寿命试验作为药物延缓衰老研究的主要检测手段。减缓自由基的生成、提高抗氧化能力、促进细胞增殖、提高免疫能力、对抗凋亡而发挥延缓衰老的功效，生命活力的提高及内分泌免疫相关基因上调等等也是抗衰老的重要目的。

桑黄是一种名贵的药用菌，桑黄活性成分的组成与含量是其保健治疗作用的根本。其报道较多的主要活性成分有桑黄多糖、黄酮类化合物、萜类化合物、吡喃酮类化合物、甾体类化合物等，药用成分表现在调节免疫、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、抑菌消炎、增强免疫力、保护肝脏，抗炎、止痛与免疫调节作用上预防和治疗关节炎等作用。近年来国内对的抗肿瘤和提高免疫等方面对的学术研究及报道大量涌现，除此之外，桑黄的保肝、抗肝硬化作用有很多报道，桑黄具有对试验大鼠减轻肝细胞损伤，降低肝纤维化，改善肝脏微循环的作用，还可以降低空腹与餐后血糖浓度的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高果蝇寿命基因表达量的处理方法及验证方法，该处理方法具有操作简便，使果蝇寿命有关的基因的表达量增加，这对人类如何延长寿命提供了重要的理论价值和使用价值。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种提高果蝇寿命基因表达量的处理方法，包括以下步骤：

(1)桑黄子实体的获得；(2)桑黄水体液的制备；(3)桑黄水体液冷冻干燥得冻干粉；(4)冻干粉配置母液；(5)母液稀释得稀释液；(6)稀释液倒入培养基，加酵母粉形成含有桑黄水提物的培养基；(7)收集处女果蝇；(8)对处女果蝇在含有桑黄水提物的培养基中培养；(9)及时更换培养基。

其中，步骤(1)中桑黄子实体采自吉林省；为野生桑树上采集，并经专业人员鉴定；

其中，步骤(2)具体为，将干燥的桑黄子实体小颗粒与水按照重量比1:10的比例，在100℃沸水中煮2h，12000G/min下室温离心30min，滤得残渣进行二次提取，合并收集上清液到离50mL灭过菌的管心中。

其中，步骤(3)具体为，将装有上清液的离心管放在冷冻干燥器使其冷冻干燥成干粉备用；所述冷冻干燥器的冷冻温度为-55℃，干燥时间为15d。

其中，步骤(4)具体为，取干粉采用水配置成1mg/mL的母液备用。

其中，步骤(5)具体为，将步骤(4)的母液进行稀释，具体依次为：