[发明专利]一种从关木通中分离纯化马兜铃酸类化合物的方法

权利要求书

1.一种从关木通中分离纯化马兜铃酸类化合物的方法，其特征在于，所述方法包括：

S1、将关木通粉碎后使用乙醇加热回流提取，减压浓缩得浸膏，用水混旋得混合物，依次使用等体积石油醚、乙酸乙酯萃取2～4次，合并乙酸乙酯萃取液减压蒸干得马兜铃酸总提取物；

S2、将马兜铃酸总提取物采用pH区带逆流色谱进行分离和富集，得到相应的组分；其中，所述分离采用石油醚/乙酸乙酯/正丁醇/水体系；

所述步骤S1中，加热回流提取条件具体为：关木通与乙醇的质量体积比为1kg:7～9L；加热回流提取温度控制为：90～100℃，加热回流提取时间为1.5～2.5h；关木通药材与水的质量体积比为1kg:0.8～1.2L；

所述步骤S2中，石油醚/乙酸乙酯/正丁醇/水体系体积比为5:5:1:6-8:2:1:6；石油醚/乙酸乙酯/正丁醇/水体系分层后，形成上相固定相和下相流动相，在上相固定相中加入三氟乙酸；在下相流动相中加入三乙胺；

上相固定相中三氟乙酸浓度为10mM；下相流动相中三乙胺浓度为10mM。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，加热回流提取条件具体为：

关木通与乙醇的质量体积比为1kg:8L；

加热回流提取温度控制为：100℃，加热回流提取时间为2h。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中，关木通药材与水的质量体积比为1kg:1L。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中，石油醚/乙酸乙酯/正丁醇/水体系体积比为5:5:1:6。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2具体方法为：

将两相溶剂体系中已超声脱气的上相固定相以10～20ml/min的速度泵入高速逆流色谱仪的分离管中，控制逆流色谱仪转速为800～900rpm；

将马兜铃酸总提取物溶解后注入高速逆流色谱仪中，然后以1～3ml/min的速度泵入下相流动相；

调节紫外检测器波长为254nm，根据检测器紫外光谱图接收各馏分，分离得到各马兜铃酸类化合物。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤S2具体方法为：

将两相溶剂体系中已超声脱气的上相固定相以20ml/min的速度泵入高速逆流色谱仪的分离管中，控制逆流色谱仪转速为850rpm；

将马兜铃酸总提取物溶解后注入高速逆流色谱仪中，然后以2ml/min的速度泵入下相流动相。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述马兜铃酸总提取物溶解具体方法为：取等量的加入三氟乙酸的上相和未加入三乙胺的下相混合后溶解马兜铃酸总提取物；

每克马兜铃酸总提取物使用5～10ml加入三氟乙酸的上相和5～10ml未加入三乙胺的下相的混合物进行溶解。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，每克马兜铃酸总提取物使用10ml加入三氟乙酸的上相和10ml未加入三乙胺的下相的混合物进行溶解。

9.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤S2还包括使用高效液相色谱分析马兜铃酸总提取物和各馏分，所述高效液相色谱条件为：Unitary C18柱54.6mm×250mm，i.d.，μm；流动相：乙腈和0.5％乙酸水溶液体积比45:55；流速：1.0L/min；检测波长：250nm。

10.权利要求1-9任一项所述方法在马兜铃酸类单体化合物分离制备中的应用，所述马兜铃酸类单体化合物包括马兜铃酸I、马兜铃酸II、马兜铃酸IIIa和马兜铃酸Iva；

其中，马兜铃酸I、马兜铃酸II、马兜铃酸IIIa和马兜铃酸Iva的结构式为：