[发明专利]一种免疫活性肽的筛选方法

说明书

本发明涉及一种免疫活性肽的筛选方法，所述筛选方法包括如下步骤：S1、通过水解酶水解至少一种含有免疫活性肽的蛋白质，获得免疫活性肽组成的肽库，所述肽库中的多肽通过质谱技术获得其肽序；S2、筛选出与MHCⅡ类分子有强结合的肽序；S3、合成S2中筛选出的肽序；S4、构建LPS诱导的细胞模型用于验证S3所合成的多肽的免疫活性。本发明可避免后续对肽序和结合位点的繁琐鉴定，直接获得与MHCⅡ类分子结合的多肽；且可以对多肽与MHCⅡ类分子结合的反应原性和免疫原性同时进行说明，使数据更完善，获得多肽的过程更快捷，效率更高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种免疫活性肽的筛选方法。

背景技术

近年来，老龄化、肥胖症、睡眠时间或质量下降、吸烟与饮酒等不良生活习惯导致的机体免疫力下降而引发各种疾病的现象日趋严重。寻求适宜的免疫调节剂来提高人体免疫能力，成为了人们的迫切需求。目前获得免疫活性肽的方法主要是分离纯化技术，而利用线上预测方法结合实验筛选获得免疫活性肽的手段十分有限。当前的分离纯化技术，主要依据分子量大小、离子强度、疏水性质等各种分子特性将肽库中的多肽分离为不同的组分，再通过免疫指标对组分进行评价，筛选出免疫活性高的纯肽或混合肽组分。这些方法分离组分过多，实验过程繁琐，且大大降低了活性肽的筛选效率。

发明内容

基于此，本发明的目的就是提供一种免疫活性肽的筛选方法，该筛选方法耗时短、操作简单，且筛选效率高。

为实现上述目的，采用如下技术方案：

一种免疫活性肽的筛选方法，所述筛选方法包括如下步骤：

S1、通过水解酶水解少一种含有免疫活性肽的蛋白质，获得免疫活性肽组成的肽库，所述肽库中的多肽通过质谱技术获得其肽序；

S2、筛选出与MHCⅡ类分子有强结合的肽序；

S3、合成S2中筛选出的肽序；

S4、构建LPS诱导的细胞模型用于验证S3所合成的多肽的免疫活性。

在一些实施方式中，所述蛋白质选自植物来源的蛋白质和动物来源的食源性蛋白质中的一种或多种组合。

在一些实施方式中，所述水解酶选自胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或多种组合。

在一些实施方式中，所述与MHCⅡ类分子结合的表位选自下组：DRB1*0101、DRB1*0301、DRB1*0401、DRB1*0701、DRB1*1101、DRB1*1501、H-2-IAb和H-2-IAd。

在一些实施方式中，所述S4步骤包括：

建立LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞模型，以NO为初级指标，并通过对细胞炎症因子TNF-α、iNOS、IL-6和IL-1β在蛋白水平和mRNA水平的考察以此验证合成多肽的免疫活性。

在一些实施方式中，所述多个为3以上。

在一些实施方式中，所述S2中与所述MHCⅡ类分子有强结合的肽序选自：SEQ IDNO.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37。

在一些实施方式中，在S2步骤中，与MHCⅡ类分子强结合的％Rank值设定为2，弱结合的％Rank值设定为10。