[发明专利]一种基于三级培养基的蔓越莓快速繁殖再生方法

说明书

本发明涉及一种基于三级培养基的蔓越莓快速繁殖再生方法。本发明包括：(1)外植体的选择和消毒；(2)初代诱导培养基的筛选；(3)继代快速增殖培养基的筛选；(4)生根培养基的筛选；(5)培养条件。本发明所提供的基于三级培养基的蔓越莓快速繁殖再生方法，是蔓越莓组织培养的快速繁殖方法，所提供的培养基，是针对蔓越莓不同培养阶段的培养目的来设计的，可以满足不同培养阶段的培养目的对营养成分的需求，符合蔓越莓的生长发育特点，营养元素的配比更为合理，可以有效的诱导不定芽，平均诱导率达到92％。

技术领域

本发明涉及一种基于三级培养基的蔓越莓快速繁殖再生方法。

背景技术

蔓越莓是杜鹃花科越橘属(Vacinium macrocarpon)植物，蔓越莓果实的营养价值和药用价值较高，是一种极具开发前景的小浆果。长期以来蔓越莓在北美的一些地区被广泛种植，而在中国蔓越莓尚处于野生状态，仅在东北等地分布有一些野生种，目前尚无商业化的栽培。近年来，全世界对蔓越莓的需求量呈逐年增长趋势，鲜果价格不断攀升，种苗数量和质量是制约优良品种推广的主要因素之一。蔓越莓播种、扦插等繁殖方法繁殖率均很低，组织培养繁殖速度快于常规的繁殖方法，可以不受季节限制周年生产，因此开展蔓越莓优良品种的组织培养技术研究尤为重要。

越橘组织培养研究开始于1976年由I.Hall最先研究报道，我国最早的相关报道是1990年陈慧都发表的。植物组织培养的培养基的选择非常重要，在已有的报道中越橘组织培养的培养基，因品种不同、外植体的选择不同，差异较大，即使是相同品种的研究得到的结论也不一致，甚至是相反的，例如：Wolf等研究发现Zimmerman培养基不适合高丛越橘快速繁殖，而Chandler和Draper研究发现Zimmerman培养基适合高丛越橘的快速繁殖，马艳丽研究认为改良MS(矿物质含量降低到1/2MS水平)培养基对高丛越橘组培效果好，兔眼越橘组织培养适宜的培养基为改良Knops培养基，游来秋研究得出越橘花药愈伤组织再分化增殖培养基以WPM培养基最优，马怀宇等研究越橘叶片认为改良的WPM培养基为最适培养基。

虽然越橘属其他种的组织培养已积累了一定的经验，但是由于越橘品种间差异很大，对营养成分的需求也不同，特别是对离子浓度非常敏感，不适合的培养基会造成外植体的褐化、干枯，影响植株再生，这可能是与植物本身的遗传特性有关系，因此不定芽的诱导有一定的难度，而目前关于蔓越莓组织培养的研究非常少，因此开展蔓越莓再生体系的研究非常必要。蔓越莓的常规繁殖方式受季节影响较大，且繁殖率很低，繁殖速度慢，种苗退化严重，利用组织培养既可以获得无病毒的种苗，又可以保持原品种的优良特性，加快繁殖速度，满足规模化生产的需求，因此开展蔓越莓快速繁殖生产技术的研究非常迫切，具有广阔的市场前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于三级培养基的蔓越莓快速繁殖再生方法，提供快速繁殖的各个阶段的培养基，可以提高繁殖系数，加快繁殖速度，生根率高，节约培养成本。

本发明的技术方案包括以下步骤：

(1)外植体的选择和消毒：将采集的外植体于超净工作台上消毒后接种在初代诱导培养基上；

(2)初代诱导培养基的筛选：将外植体切成适当大小接种在MY1+ZT0.5～1.0mg/L或者MY+ZT0.5～1.0mg/L培养基上，诱导不定芽；

(3)继代快速增殖培养基的筛选：将步骤(2)诱导出来的不定芽转入继代培养基中进行增殖培养，培养基为:MY+KT1.0～2.0mg/L+ZT 0.5～2.0mg/L+IBA0.1～0.3mg/L或者MY+6-BA1.0～3.0mg/L+ZT0.5～2.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L；

(4)生根培养基的筛选：将步骤(3)获得的丛生苗切成2～3cm的单株转入生根培养基中诱导生根，生根培养基为：1/2MY+NAA 0.1～0.3mg/L或者1/2MY+IBA0.1～0.3mg/L；