[发明专利]一种高效液相色谱测定二芥酰磷脂酰胆碱含量的方法

说明书

本发明公开了一种二芥酰磷脂酰胆碱的高效液相色谱检测方法，其色谱条件为：C₁₈色谱柱；流动相：A相为体积比为9:1的甲醇与磷酸盐缓冲液的混合溶液，B相为体积比为15:10:1的三氯甲烷、甲醇与磷酸盐缓冲液的混合溶液，按一定梯度条件洗脱，使用ELSD检测器，进行高效液相色谱分析，测定二芥酰磷脂酰胆碱的含量。本发明通过一次高效液相检测，能够准确测出二芥酰磷脂酰胆碱的含量，且与其有关物质能够达到很好的分离效果，节省了人工、时间和溶剂成本。

技术领域

本发明涉及一种利用高效液相色谱法测定二芥酰磷脂酰胆碱含量的方法，属于仪器分析技术领域。

背景技术

二芥酰磷脂酰胆碱是一种人工合成磷脂，是脂质体制剂——布比卡因脂质体中重要的药用辅料成分。合成磷脂的质量研究在脂质体制剂质量和工艺评价中发挥着重要作用，直接关系制剂的质量研究。二芥酰磷脂酰胆碱目前已收载于美国食品药品管理局非活性药用成分(辅料)数据库中，但其质量标准还未收载于中国药典(CH.p2015)、美国药典(USP4.0)、欧洲药典(EP 9.0)中。目前，尚无二芥酰磷脂酰胆碱的含量测定方法。

溶血磷脂酰胆碱是二芥酰磷脂酰胆碱在自然降解或者磷脂酶的作用下从1位或2位酯键断裂产生的单链脂肪酰衍生物，其来源于二芥酰磷脂酰胆碱的合成过程中反应不完全产生或目标物降解而成。溶血磷脂酰胆碱具有一定的溶血作用，从而改变细胞膜的渗透性，因此直接关系着产品的安全性。二芥酰磷脂酰胆碱的合成以芥酸和甘油磷酸胆碱为起始原料，经缩合、重复析晶精制得到，故芥酸为二芥酰磷脂酰胆碱的专有性游离脂肪酸，其来源于反应开始前的过量原料或目标物降解而成，过量的芥酸直接影响二芥酰磷脂酰胆碱的含量测定，故开发一种液相色谱方法分离二芥酰磷脂酰胆碱及其有关物质具有一定必要性。二芥酰磷脂酰胆碱及其有关物质在使用紫外检测器时，由于使用甲醇、乙腈等作为稀释剂，而检测波长也位于200～210nm处，溶剂会产生末端紫外吸收效应，因此干扰检测结果，另外溶血磷脂酰胆碱在以往的色谱条件下，响应值较低，需要较大的进样量，从而对色谱系统造成一定的负担，本发明开发出的液相色谱方法可有效解决上述问题，从而获得较好的分离度。

发明内容

针对目前尚无合成磷脂二芥酰磷脂酰胆碱的含量测定方法，本发明提供一种二芥酰磷脂酰胆碱的高效液相色谱检测方法。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种液相色谱测定二芥酰磷脂酰胆碱含量的方法，色谱条件为：

色谱柱：高效液相反相色谱柱，优选采用C₁₈色谱柱；

流动相：A相为体积比为9:1的甲醇与磷酸盐缓冲液的混合溶液，优选磷酸盐缓冲液的浓度为0.5-0.8mol/L，pH值为4.0-4.5。B相为体积比为15:10:1的三氯甲烷、甲醇与磷酸盐缓冲液的混合溶液，优选磷酸盐缓冲液的浓度为1mol/L，pH值为4.0-4.5。优选梯度洗脱条件如下表所示：