[发明专利]一种二硫化钼芯片的制备方法及应用

说明书

本发明涉及生物技术检测领域，具体涉及一种二硫化钼芯片的制备方法及应用。本发明所述方法利用二硫化钼结合纳米金形成二硫化钼金复合材料，在氨基化的固相载体上，氨基与纳米金之间相互作用固定二硫化钼金纳米复合材料，再共价连接核酸适配体，对带荧光的DNA进行淬灭，随着加入可卡因浓度的不同，荧光也有对应的恢复，得到可卡因检测标准曲线，实现对可卡因浓度的检测。本发明检测方法简单、成本低、灵敏度高且具有特异性，可同时进行多样本检测，所得的结果直观，容易辨别。

技术领域

本发明涉及生物技术检测领域，具体涉及一种二硫化钼芯片的制备方法及应用。

背景技术

生物芯片在分子检测领域发挥了不可或缺的功能，其融合了生物学和工程学的优点。生物芯片利用微阵列技术在固相基质上连接大量生物元件，如细胞、蛋白、DNA，分为主动式和被动式两种；被动式中的生化反应是通过分子的自由扩散来完成，没有人为或物理作用干涉。其相对而言具有一定的缺陷，如合成以及检测过程中的主观因素干扰、难以控制的生化反应条件和过程、检测率及精确度低。主动芯片恰恰利用了人为或物理作用干涉，改善了这些问题，对芯片上的生化反应进行有效控制，又称为芯片型实验室（lab on chip），可实现高效、快速、自动化检测，但现有芯片制备工艺复杂、成本高、其灵敏性仍需要提高，本发明结合纳米材料二硫化钼制备二硫化钼芯片在高通量检测的同时能有效提高检测的灵敏性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于二硫化钼芯片检测可卡因的方法。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种二硫化钼芯片的制备方法，所述方法包括以下步骤：

（1）将浓硫酸和过氧化氢溶液混合，加入固相载体，浸泡后超纯水清洗后晾干；

（2）将步骤（1）中晾干后的固相载体放入含有2%-3%的3-氨基丙基三乙氧基硅烷（APTES）与乙醇的混合液中震荡后清洗晾干，获得氨基化的固相载体；

（3）取二硫化钼、纳米金与水混合反应30分钟，加入乙二醇，搅拌后离心洗脱，得到二硫化钼金复合材料，将二硫化钼金复合材料滴加在步骤（2）中制备得到的氨基化的固相载体上，室温下反应12小时，用PBS缓冲液缓慢清洗，去除未固定的二硫化钼金，得到固定有二硫化钼金的固相载体；

（4）在步骤（3）得到的固定有二硫化钼金的固相载体上加入含有巯基修饰的核酸适配体，培育清洗后得到二硫化钼芯片。

进一步地，步骤（1）中所述的浓硫酸和过氧化氢的体积比为7:3。

进一步地，步骤（1）中所述的固相载体为载玻片或成分为二氧化硅的玻璃片。

进一步地，步骤（3）中所述的二硫化钼、纳米金、水和乙二醇的用量关系为1g：1g：1mL:1~5mL。

步骤（3）中，所用二硫化钼金复合材料的浓度为50~150μg/mL。

步骤（3）中，所述的搅拌为90℃下搅拌5h。

步骤（4）中，所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO：1所示，核酸适配体的浓度为1~20nM。

步骤（4）中，所述的培育清洗为4℃下过夜培育后PBS缓冲液缓慢清洗。

本发明还提供一种基于制备的二硫化钼芯片检测可卡因的方法，所述方法通过二硫化钼芯片多次测定不同可卡因浓度下的荧光强度，得到标准曲线，再根据所述标准曲线检测待测可卡因浓度。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：