[发明专利]20-羟基蜕皮激素在促进冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝中的应用

说明书

本发明公开了20‑羟基蜕皮激素在促进冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝中的应用。本发明针对冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝体时间长，冬虫夏草人工培养周期长和效率低等问题，在冬虫夏草菌培养基中添加20‑羟基蜕皮激素对芽生孢子进行菌丝诱导培养，培养第2天即发现芽生孢子萌发形成菌丝，培养第8天芽生孢子萌发形成长菌丝，菌丝形成率较不添加诱导物质对照提高32.25～171.44％。本发明促进芽生孢子以形成菌丝的方式生长，提高了冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝的效率。

技术领域：

本发明属于真菌培养技术领域，具体涉及20-羟基蜕皮激素在促进冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝中的应用。

背景技术：

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis是我国传统的名贵中药材，与人参、鹿茸被誉为中华医学三大宝。冬虫夏草是由冬虫夏草菌(又名中华被毛孢，中国被毛孢)侵染蝙蝙蝠蛾科Hepialidae幼虫形成的僵虫与真菌子座复合体。冬虫夏草生境特殊(仅在高海拔高寒草甸环境自然繁衍)，生长速度缓慢，周期较长，自然资源极为有限。虽然冬虫夏草已被列入《国家重点保护野生植物名录》二级保护物种，但冬虫夏草的过度采挖并没有得到有效遏制。在栖息地退化、全球气候变暖，尤其是冬虫夏草的过度开发利用等多种因子的综合影响下，天然冬虫夏草资源蕴藏量急剧下降(Hopping KA,Chignell SM,Lambin EF.The demiseofcaterpillar fungus in the Himalayan region due to climate change andoverharvesting.Proc Natl Acad Sci USA.2018,115:11489-11494)。

近年来，通过模拟青藏高原生态环境，利用冬虫夏草菌侵染蝙蝙蝠蛾幼虫成功培养冬虫夏草，冬虫夏草菌侵染蝙蝠蛾幼虫进入血腔后，主要以芽生孢子形式存在血淋巴中，芽生孢子以出芽萌发产生新的芽生孢子的方式进行增殖，需要5个月以上的时间芽生孢子才形成菌丝体，而且有些蝙蝠蛾幼虫携带芽生孢子生长1年以上而不形成菌丝体，而芽生孢子发育形成菌丝是冬虫夏草菌致死幼虫并长出子实体的关键环节。因此，如何促进芽生孢子发育形成菌丝从而缩短子座培养时间是目前冬虫夏草人工培养产业面临的重要问题。

20-羟基蜕皮激素是昆虫前胸腺中合成后分泌到血液中的一种甾醇类化合物，在昆虫变态发育过程中起到关键作用，目前尚未见该物质对真菌生长影响方面的报道。

发明内容：

基于上述问题，本发明的目的是提供20-羟基蜕皮激素在促进冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝中的应用，从而解决冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝的时间长，人工培养冬虫夏草周期长的问题。

本发明通过实验发现，在冬虫夏草菌培养基中加入20-羟基蜕皮激素可以促进冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝。

因此，本发明的第一个目的是提供20-羟基蜕皮激素在促进冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝中的应用。

所述的应用是在冬虫夏草菌培养基中加入20-羟基蜕皮激素，然后接种冬虫夏草菌芽生孢子进行诱导培养。

本发明的第二个目的是提供20-羟基蜕皮激素在制备促进冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝制剂中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种促进冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝的方法，在冬虫夏草菌培养基中加入20-羟基蜕皮激素，然后接种冬虫夏草菌芽生孢子进行诱导培养，冬虫夏草菌芽生孢子发育形成菌丝。

所述的冬虫夏草菌培养基优选为液体培养基。

所述的20-羟基蜕皮激素，其在液体培养基中的浓度为0.5mM以上。

所述的在冬虫夏草菌培养基中加入20-羟基蜕皮激素，然后接种冬虫夏草菌芽生孢子进行诱导培养，其芽生孢子的接种终浓度不高于10⁷个/mL，进一步优选为10⁵-10⁷个/mL。