[发明专利]一种快速检测生物组织切片COSMC基因突变试剂盒

说明书

本发明及生物医学领域，具体涉及一种快速检测生物组织切片COSMC基因突变试剂盒。该试剂盒内含：1)荧光(红色)凝集素HAA浓缩液1管和2)荧光(绿色)凝集素PNA浓缩液1管、3)细胞核荧光染色剂DAPI1管。4)凝集素稀释液1瓶、5)TBS缓冲液1瓶、6)抗原修复液1瓶、7)封片剂1瓶、8)阳性对照病理切片1塑料盒(五张)、9)说明书和10)质检报告各一份。此外，试剂盒的盒体和盒内带下凹位的试剂架均为硬纸材料。本试剂盒通过荧光免疫凝集素直标双染色法，同时检测组织切片中CD175抗原和CD176抗原的表达情况，HAA阳性同时PNA阴性者，即表明COSMC基因突变和T‑合酶活性丧失。该产品能迅速确定生物组织切片COSMC基因突变和T‑合酶失活情况，对于研究T‑合酶生物学意义以及与人类疾病的关系都有重要的意义。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种快速检测生物组织切片COSMC 基因突变试剂盒，COSMC是T-合酶(T-synthase)的分子伴侣，T-合酶又叫半乳糖基转移酶(core1β3-galactosyltransferase)，COSMC基因突变意味着T-合酶活性的丧失，诱发肿瘤的发生和转移。

背景技术

T-合酶是合成核心1(core1)结构的唯一糖基转移酶，在分子伴侣COSMC 的协助下，将半乳糖(Galactose)添加到CD175抗原(GalNAcα1-Ser/Thr) 糖链上形成CD176抗原。用示意图可以简单表述为：CD175+UDP-Galactose_{T-合酶(COSMC)}CD176抗原。在人体和其他脊椎动物中，T-合酶失活将导致机体细胞内堆积大量的CD175抗原，但是仅有肿瘤糖蛋白CD175抗原的过量表达，并不代表COSMC基因突变及T-合酶活性丧失，相反有时CD175表达增多时，往往伴有T-合酶活性异常升高。当只有CD175抗原过量表达而没有CD176抗原同时表达时，才能确认COSMC基因突变和T-合酶丧失活性。T-合酶的活性正常与否与癌症发生和转移密切相关。目前，已有一些检测新鲜组织细胞裂解液T-合酶活性的方法，原文的标题是Anovel fluorescent assayfor T-synthase activity，文献发表在2010年的《Glycobiology》volume21(3) p352-362上，该方法只能用于新鲜的组织细胞样品，检测方法比较繁琐，且不能用于病理组织切片的快速检测。

发明内容:

有鉴于此，本发明研制一种快速检测生物组织切片COSMC基因突变试剂盒。该试剂盒包括：1)1管标记荧光的抗CD175抗原的凝聚素HAA(蜗牛凝集素，Helixaspersa)。2)1管标记荧光的能与CD176抗原特异性结合的凝聚素PNA(花生凝集素，Peanut lectin)。3)1管细胞核荧光染色剂DAPI。 4)1瓶荧光凝聚素稀释液。5)1瓶TBS缓冲液。6)1瓶抗原修复液。7)1瓶封片剂。8)1塑料盒(五张)阳性对照病理切片、9)一份说明书和10) 一份质检报告。本试剂盒用荧光凝集素双染色法，同时检测病理组织切片 CD175和CD176抗原，HAA阳性同时PNA阴性的组织细胞即表明COSMC 基因突变和T-合酶失活(见下图)；而PNA阳性和HAA与PNA双阳性者则表明T-合酶活性依然存在，甚至T-合酶活性增高。

本发明的有益效果如下：本发明通过荧光凝聚素双染色法的检测方法，快速判定病变组织COSMC基因突变的存在与否，目前已证实在消化道组织中，发生COSMC基因突变的病变部位，其癌变率明显增高，例如结肠息肉伴有COSMC基因突变则癌变风险增大。因此，结肠镜检查时如发现息肉应作COSMC基因突变的快速检测，有利于对病人采取及时有效的治疗措施。

附图说明