[发明专利]净化黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素、环匹阿尼酸免疫吸附剂及复合亲和柱

说明书

本发明提供了一种净化黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素、环匹阿尼酸免疫吸附剂及复合亲和柱。黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素、环匹阿尼酸免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗杂色曲霉毒素单克隆抗体和抗环匹阿尼酸单克隆抗体，所述的环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2分泌产生的单克隆抗体。本发明提供的黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素、环匹阿尼酸免疫亲和柱可用于同时含有三种黄曲霉菌毒素样品的净化‑检测前处理，三种之间无相互干涉影响，性能稳定，进而通过使用本亲和柱建立了一种经济，快捷，精确，安全的高效液相色谱‑质谱联用仪检测方法。

技术领域

本发明涉及净化黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素、环匹阿尼酸免疫吸附剂及复合亲和柱。

背景技术

黄曲霉菌一种常见腐生真菌，生长温度范围较宽，易在温湿度较高的环境中生长繁殖，且能在极端环境条件下存活并生长繁殖。黄曲霉菌侵染花生、玉米、坚果等农产品后，能产生多种有毒真菌毒素，引起人和动物的健康问题。

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉等产生的一组结构类似的次生代谢产物，是一组以双呋喃环和香豆素为基本结构的化合物，化学结构十分稳定，且具有非常强的毒性和致癌性，广泛存在于粮食谷物和饲料及其加工品中。黄曲霉毒素已被世界卫生组织的癌症研究机构将其定Ⅰ类致癌物质，其中AFB1的毒性最强，它的毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍。黄曲霉毒素是一类剧毒化合物，具有致癌、致畸、致突变的作用，主要作用于肝脏，长期食用含有低水平黄曲霉毒素食物的人其肝脏也将受到损害。

杂色曲霉毒素是由杂色曲霉、黄曲霉、构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物，是黄曲霉毒素生物合成的前体物。杂色曲霉毒素的化学结构与黄曲霉毒素结构相似，都有两个呋喃环。杂色曲毒在自然界中分布广发，易存在于饲草、小麦、花生、玉米等农产品。杂色曲霉毒素毒性仅次于黄曲霉毒素,具有肝毒性,肾毒性,细胞遗传毒性和强致癌性,污染词料以及农产品后,会直接或间接进入人类食物链,从而严重威胁人类健康以及生命安全,其危害程度摄入量成正相关。

环匹阿尼酸主要是由黄曲霉和寄生曲霉分泌产生的次生代谢产物，是一种能引起人畜各种损害的天然有毒化合物。环匹阿尼酸化学性质稳定，一般的储存条件和加工过程不能破坏，即使经过巴氏杀菌，也几乎完全不能被破坏。环匹阿尼酸广泛存在于大米、玉米、花生、饲料等农产品和奶酪等食品中，污染食品及饲料后，会直接或间接进入食物链，威胁人畜的健康和生命安全。因此加强对农产品及食品中环匹阿尼酸的检测、特别是速测，以便及时了解和掌握食品及饲料的卫生信息。

目前，现有环匹阿尼酸等毒素的检测方法包括薄层层析法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等。其中薄层层析法不需要特殊的仪器设备，但不能准确定量，且对实验人员和周围环境污染危害较大。高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等精密仪器分析法灵敏度高，准确性好，样品前处理过程繁琐。免疫亲和色谱柱是一种新型的样本前处理技术，它是将免疫反应与色谱分析方法相结合，利用抗原抗体结合的高度特异性和亲和力，用化学偶联键合方法将特异性抗体结合到层析吸附剂上，基于免疫学可逆结合来实现对复杂样品中目标物质的效的分离和富集净化。目前，尚未见有化黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素、环匹阿尼酸免复合亲和柱的相关报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种净化黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素、环匹阿尼酸免疫吸附剂、复合亲和柱及应用。

为了实现上述目的本发明采用的技术方案是：

黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素、环匹阿尼酸抗体免疫吸附剂，所述的免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的抗黄曲霉毒素单克隆抗体、抗杂色曲霉毒素单克隆抗体和抗环匹阿尼酸单克隆抗体，所述的环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201871的杂交瘤细胞株YTT-2分泌产生的单克隆抗体。