[发明专利]利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法在审
| 申请号： | 201910363956.0 | 申请日： | 2019-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN110004143A | 公开（公告）日： | 2019-07-12 |
| 发明（设计）人： | 张丹;李志业;伊鹏;郭科建;宣树卿;康成良;林改革 | 申请（专利权）人： | 山东森芃生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 胡剑辉 |
| 地址： | 264333 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 骨骼 牙齿 四乙酸 二乙酰胺 裂解液 螯合作用 脱钙 细胞膜 表面活性剂 高效快速 蛋白酶K 二酰胺 漂洗 钙质 裂解 洗脱 蛋白质 消化 释放 | ||
1.利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法，其特征在于：包含以下操作步骤：
(1)将300mg骨骼粉末或牙齿粉末放入离心管中，往其中加入500ul裂解液，于50-60℃条件下加热裂解1-12小时；
(2)将步骤(1)中的离心管置于离心机中，以12000转每分钟的速度离心1-5分钟，将上清液转移至新的离心管中，加入750ul结合液并混合均匀；
(3)将步骤(2)新的离心管中的混合液转移至离心柱中，将离心柱置于离心机中，以12000转每分钟的速度离心0.5-2分钟；
(4)倒弃步骤(3)离心柱收集管中的液体，将离心柱放回离心柱收集管内，往离心柱中加入700ul漂洗液，于离心机中12000转每分离心0.5-2分钟；
(5)倒弃步骤(4)离心柱收集管中的液体，将离心柱放回离心柱收集管内，于离心机中12000转每分离心2-5分钟；
(6)将步骤(5)离心柱放入新的离心管内，往离心柱底部的硅胶膜中加入10-200ul洗脱液，静置3-10分钟，于离心机中以12000转每分钟的速度离心0.5-2分钟，丢弃离心柱，离心管内液体即为DNA溶液。
2.根据权利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法，其特征在于：步骤(1)所述裂解液包含:10-500mmol/l二乙酰胺四乙酸钠、0.1-2％(w/v)十二烷基硫酸钠、0.1-5mg/l蛋白酶K、0-0.1mol/l二硫苏糖醇、5-100mmol/l三羟甲基氨基甲烷,pH值7.0-8.5。
3.根据权利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法，其特征在于：步骤(2)所述结合液包含：40％-60％(w/v)异硫氰酸胍、8-18％(w/v)曲拉通X-100、50-200mmol/l柠檬酸钠，pH值5.0-6.0。
4.根据权利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法，其特征在于：步骤(3)所述离心柱为分子生物学实验中常用耗材，其底部装配有硅胶膜。
5.根据权利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法，其特征在于：步骤(4)所述漂洗液为70-85％(v/v)乙醇。
6.根据权利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法，其特征在于：步骤(6)所述洗脱液包含10mmol/l三羟甲基氨基甲烷、1mmol/l乙二胺四乙酸二钠，pH8.0。
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