[发明专利]在枯草芽孢杆菌中表达真实的和具有生物活性的碱性成纤维细胞生长因子的方法和工具在审
| 申请号： | 201910367163.6 | 申请日： | 2019-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN110452909A | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 黄允强;胡秀华;吴嘉伦;林翠芝 | 申请（专利权）人： | 林翠芝 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/75;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 11283 北京润平知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘依云;乔雪微<国际申请>=<国际公布> |
| 地址： | 中国香港九龙黄*** | 国省代码： | 中国香港;HK |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 宿主 枯草芽孢杆菌 插入物 人碱性成纤维细胞生长因子 补料分批发酵 纤维素结合域 生物活性 摇瓶培养 内含肽 氨基酸 多肽 修饰 转化 引入 | ||
1.一种产生细胞内的146个氨基酸的真实的和具有生物活性的人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的方法，在所述bFGF的C-或N-末端没有任何修饰，包括以下步骤：提供枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)宿主和将DNA构建体导入枯草芽孢杆菌宿主中以产生转化的枯草芽孢杆菌宿主，其中所述DNA构建体包括插入物，所述插入物从5'端至3'端包括纤维素结合域(CellBD)、内含肽序列和编码bFGF多肽的DNA，以及使转化的枯草芽孢杆菌宿主经历摇瓶培养过程或补料分批发酵过程，从而使转化的枯草芽孢杆菌宿主能够产生可溶形式的bFGF，其被切割并独立于由细胞内的在插入物中编码bFGF DNA之前和之后的DNA区域编码的蛋白质。
2.如权利要求1所述的方法，其中内含肽序列是Ssp DnaB。
3.如权利要求1所述的方法，其中当进行摇瓶培养过程时，包括使用具有100ml培养基的摇瓶的步骤；或当进行补料分批发酵过程时，包括使用具有2L培养基的发酵罐的步骤。
4.如权利要求3所述的方法，其中通过补料分批发酵方法生产bFGF的量是摇瓶培养过程的两倍以上。
5.一种由枯草芽孢杆菌宿主工程改造的生物系统，其包含DNA构建体，所述DNA构建体包含插入物，所述插入物从5'端至3'端包括纤维素结合域(CellBD)、内含肽序列和编码bFGF多肽的DNA。
6.如权利要求5所述的系统，其中内含肽序列是Ssp DnaB。
7.一种DNA构建体，其包含插入物，所述插入物从5'端至3'端包括纤维素结合域(CellBD)、内含肽序列和编码bFGF多肽的DNA，其中所述bFGF多肽是细胞内的146个氨基酸的真实的和具有生物活性的人碱性成纤维细胞生长因子，在所述bFGF的C-或N-末端没有任何修饰。
8.如权利要求7所述的DNA构建体，其中内含肽序列是Ssp DnaB。
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