[发明专利]一种点免疫印迹检测的检测装置及检测方法

说明书

本发明提供一种点免疫印迹检测的检测装置，包括负压吸引装置、孔板、连接孔板和负压吸引装置的软管及紧密贴合在孔板上端面的硝酸纤维膜，所述孔板包括上层托板、密封连接在上层托板下方的下层托盘及设置于上层托板、下层托盘之间的负压空腔，所述下层托盘一侧设置有一供软管套接的连接管，所述上层托板上具有70个通孔，所述硝酸纤维膜与孔板上端面的大小相同。本发明还提供一种点免疫印迹检测的检测方法，包括准备、加样、封闭、孵育一抗、孵育二抗、显影、分析的过程，本发明通过负压吸引装置进行负压吸引，有利于加样时样品的集中，避免样品扩散后交叉污染影响实验结果，实验结果更准确。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种点免疫印迹检测的检测装置及检测方法。

背景技术

目前多用Western blot或者ELISA的方法来检测目的蛋白。Western blot法：将经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离出的蛋白质样品转移到PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）上，用目的蛋白对应的抗体结合蛋白抗原，再结合酶或者同位素标记过的二抗，以化学发光的方式检测目的蛋白的表达。ELISA法：受检样品（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法把形成的抗原抗体复合物和其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，通过特异性反应而结合在固相载体上。此时固相载体上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例，所以可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。但两种方法操作复杂、样品需求量大，并且不能同时兼顾灵敏、特异、多样本检测等优点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种点免疫印迹检测的检测装置及检测方法，以解决背景技术中所提出的问题。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种点免疫印迹检测的检测装置，其特征在于，包括负压吸引装置、孔板、连接孔板和负压吸引装置的软管及紧密贴合在孔板上端面的硝酸纤维膜，所述孔板包括上层托板、密封连接在上层托板下方的下层托盘及设置于上层托板、下层托盘之间的负压空腔，所述下层托盘一侧设置有一供软管套接的连接管，所述上层托板上具有70个通孔，所述硝酸纤维膜与孔板上端面的大小相同。

进一步的，所述上层托板的尺寸为8 cm×6 cm，所述通孔直径为2 mm。

进一步的，所述负压吸引装置选用手提式吸痰器，所述手提式吸痰器的负压值设定为0.06 MPa。

进一步的，70个所述通孔呈10×7设置，每两个通孔之间距离相等。

进一步的，所述孔板的上方可拆卸连接有一压板。

其中，所述压板包括矩形边框及转动连接在矩形边框四周的卡扣，所述下层托盘的四周设置有供卡扣卡接的卡块。

本发明还提供一种点免疫印迹检测的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、准备：将手提式吸痰器通过软管和孔板相连接；将硝酸纤维膜剪至孔板上端面的上层托板大小，置于具有70个通孔的孔板上，打开手提式吸痰器，将手提式吸痰器的负压值设置为0.06 MPa，在硝酸纤维膜表面形成70个加样凹槽；

S2、加样：将70个加样凹槽分为对照品孔和样本孔，每个重复3次，对照品孔和样本孔分别加入对照品和各待测样本1μL；加样结束，将硝酸纤维膜自然晾干30 min；

S3、封闭：将硝酸纤维膜轻置于5%的脱脂奶粉溶液中，置于摇床上室温下封闭1.5 h；然后，弃去封闭液，用TBS-T漂洗1-2次；其中，5%脱脂奶粉溶液使用TBS-T溶液稀释至溶度为5%；

S4、孵育一抗：用5% 牛血清白蛋白溶液按1:500比例稀释一抗，将硝酸纤维膜均匀的完全浸入其中，置于摇床上，37 ℃恒温孵育4 h；结束后将硝酸纤维膜放入TBS-T中摇床上洗涤3次，每次5 min；其中，5%牛血清白蛋白溶液采用TBS-T溶液稀释至溶度为5%；