[发明专利]用于指导阿司匹林药物个体化用药相关基因检测的引物组合、试剂盒及方法及应用

说明书

本发明涉及一种用于指导阿司匹林药物个体化用药相关基因检测的引物组合。所述引物组合包括针对ITGB3(rs5918)、GP1BA(rs6065)、ITGA2(rs1126643)、ITGA2(rs1062535)、TBXA2R(rs4523)基因位点的特异性引物及Taqman探针。本发明还涉及包括引物组合的试剂盒及其方法及其应用。本发明提供的试剂盒及其检测方法具有操作简单、经济、检测快速、准确性高、特异性好、灵敏性好等能有效满足临床要求的优点，并且结果判读简单客观。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种用于指导阿司匹林药物个体化用药相关基因检测的引物组合、试剂盒及方法及应用。

背景技术

阿司匹林是常用的抗血小板聚集药物，它通过抑制血小板的环氧化酶，减少前列腺素的生成，而使血小板凝聚发生抑制作用，临床上广泛用于降低急性心肌梗死疑似患者的发病风险、预防心肌梗死复发、中风的二级预防、降低短暂性脑缺血发作TIA及其继发脑卒中的风险、降低稳定性和不稳定性心绞痛患者的发病风险等。

临床发现，部分患者产生阿司匹林抵抗(AR)，发生率约为5％-60％，且存在明显的个体差异。存在AR的患者更易出现血栓事件，其死亡、心肌梗死和脑血管事件发生率是阿司匹林反应正常人群的3倍。研究表明，多个血小板聚集相关蛋白的基因，包括ITGB3、GP1BA、ITGA2和TBXA2R的多态性在AR中起着重要作用。

血小板膜糖蛋白IIIa基因由ITGB3基因编码，其外显子2第1565位氨基酸的突变(rs5918)，即T1565C(Leu59Pro)，分别决定了P1A1和P1A2两种等位基因，GP IIIa P1A2是AR主要基因，携带突变型P1A2等位基因患者行支架术后，其亚急性血栓事件发生率是P1A1纯合野生型患者的5倍，一般需要更高剂量的阿司匹林才能达到抗凝效果。

GP1BA别名GP1B(血小板糖蛋白1B基因)，该基因与阿司匹林相关的有两个SNP位点，其中rs6065(145Thr-Met)和阿司匹林的毒力相关，CC基因型，AR风险增加；CT和TT型，AR风险降低。ITGA2的807T/873A等位基因增加血小板表面的GPIa/IIa密度，从而加强血小板聚集作用，造成AR。TBXA2R(血栓素A2受体)的T等位基因也被证实与AR相关。

综上，通过对基因多态性的检测判断患者是否存在阿司匹林抗性，以便通过增加阿司匹林剂量、增加使用频率、增加新药等措施降低AR的发生。

目前临床上多采取Sanger测序法、高分辨率溶解曲线法、芯片杂交法检测基因多态性。但上述方法存在以下问题，其中Sanger测序包括PCR扩增、PCR产物纯化、DNA测序等操作，步骤繁琐，实验耗时长，专业技术要求高，且测序花费高，不适合临床推广；高分辨率溶解曲线法对设备要求特殊，且检测灵敏度不高，也不适合临床推广；芯片杂交法检测灵敏度低且特异性差，容易出现假阳性结果。荧光定量PCR的检测方法拥有成本低、灵敏度高、特异性强，结果的重复性好等优点，2小时内可完成Sanger测序12-13小时才能完成的通量，大大缩短了临床检测时间，是一种非常好的基因多态性检测手段，Genotyping基因分型散点图是基于荧光定量PCR的一种更简单快速直观判读基因型的检测方法，但是目前没有基于该方法的用于指导阿司匹林药物个体化用药相关基因检测的如权利要求中的引物组合及试剂盒产品。

发明内容

为了解决传统临床经验医疗方式诊断及阿司匹林药物用药时易出现临床用药不良反应且没有快捷，经济，准确性高的试剂盒产品的技术问题，本发明提供一种操作简单、经济、检测快速、准确性高、特异性好及结果判读简单客观的用于指导阿司匹林药物个体化用药相关基因检测的引物组合、试剂盒及其方法。

本发明提供了一种用于指导阿司匹林药物个体化用药相关基因检测的引物组合，包括针对ITGB3(rs5918)、GP1BA(rs6065)、ITGA2(rs1126643)、ITGA2(rs1062535)、TBXA2R(rs4523)基因位点的特异性引物及探针，如下：