[发明专利]一种单壳缝类硅藻的高效抗菌培养基及其制备方法

说明书

本发明属于分离培养基技术领域，公开了一种单壳缝类硅藻的高效抗菌培养基及其制备方法；包括：将各组成成分混合均匀，通过加热、冷却、稀释、调整pH值、灭菌、过滤等操作获得单壳缝类硅藻高效抗菌培养基。本发明提供的单壳缝类硅藻高效抗菌培养基可高效培养单壳缝类硅藻，且培养基抗菌效果佳；利用高压、细菌过滤器双重灭菌保证灭菌效果且保证了培养液成分的活性；培养液制备时先混合组成成分，后过滤加水稀释，保证培养液混合均匀；利用磷酸钙进行酸碱度中和，避免回调，且无需再次灭菌。

技术领域

本发明属于分离培养基技术领域，尤其涉及一种单壳缝类硅藻的高效抗菌培养基及其制备方法。

背景技术

硅藻是一种单细胞藻类，每年至少贡献了全球20％以上的初级生产力，相当于热带雨林。硅藻是监测环境的重要生物指示物。单壳缝类硅藻属硅藻门，羽纹藻纲。是水环境监测中常用的敏感指示生物。

人工培养基不符合单壳缝类硅藻的生长条件，导致其在培养基中生长不好，且传统培养基成分受限，影响生长繁殖；且培养基灭菌时一般采用高温灭菌，容易影响营养液组成成分的活性；利用盐酸进行酸碱度中和，需回调且需对溶液进行二次灭菌。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种单壳缝类硅藻的高效抗菌培养基。

本发明是这样实现的，一种单壳缝类硅藻的高效抗菌培养基，所述单壳缝类硅藻的高效抗菌培养基1升按重量份数由1ml硝酸钙，1ml硝酸钾，1ml硫酸镁，1mlβ-甘油磷酸钠，0.1μg维生素B12,0.1μg生物素，10μg盐酸硫铵素，0.5g 4-羟乙基哌嗪乙磺酸，0.2g硅酸钠，30ml土壤浸出液，6ml微量元素溶液(PIV)，10μg氨苄青霉素组成。

进一步，所述在运用培养基的同时，另称取氨苄青霉素10μg，加入培养基中。

进一步，所述微量元素溶液包括：

微量元素溶液1升由0.75g乙二胺四乙酸二钠，0.097g硫酸铁，0.05g氯化锌，0.002g氯化钴，0.041g氯化锰，0.004g钼酸钠组成。

进一步，所述土壤浸出液包括：

(1)取未施肥花园土200g于110摄氏度下烘干；

(2)将烘干后的土壤放入三角瓶中，并加入1000ml的单蒸水，搅拌均匀，得土壤液瓶口用透气塞封口；

(3)将三角瓶放入沸水中煮1小时，取出三角瓶自然冷却；

(4)将冷却后的土壤液用滤纸重复过滤3次，并再次放入沸水中煮1小时，再次冷却、过滤、沉淀；

(5)取沉淀后的土壤液上清层，高压灭菌得土壤浸出液。

本发明的另一目的在于提供一种所述单壳缝类硅藻的高效抗菌培养基的制备方法，所述单壳缝类硅藻的高效抗菌培养基的制备方法包括：

步骤一、取1升锥形瓶灭菌，冷却后加入1升蒸馏水；

步骤二、依次向蒸馏水中加入硝酸钙、硝酸钾、硫酸镁、β-甘油磷酸钠、维生素B12、生物素、盐酸硫胺素、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、硅酸钠、土壤浸出液、PIV、氨苄青霉素；

步骤三、将溶液混合并搅拌均匀；

步骤四：向混合溶液中加入磷酸钙与500ml单蒸水将pH值调整至7.3±0.2；

步骤五：将混合溶液利用高压灭菌，并利用细菌过滤器将混合溶液过滤灭菌得培养液；

步骤六：将培养液放置于4摄氏度的冰箱中进行保存，用于单壳缝类硅藻的高效抗菌培养基。