[发明专利]一种试剂盒及其用于定量检测Leber遗传性视神经病突变体的应用

说明书

本发明提供了一种试剂盒及其用于定量检测Leber遗传性视神经病突变体的应用。所述试剂盒包括SEQ ID NO.1～6。本发明针对LHON线粒体基因的3种高频突变位点，建立了一种既可鉴定突变类型，还可分析突变mtDNA拷贝数/野生型的拷贝数比例的定量方法,一方面在发现高危人群，并进行有效的产前遗传咨询及诊断、婚前筛查，提高人口素质方面具有极其重要的社会意义，还可为LHON临床早期临床诊治，患者疾病严重程度判断提供临床辅助诊断依据。

技术领域

本发明涉及生物医学领域,具体涉及一种试剂盒及其用于定量检测Leber遗传性视神经病突变体的应用。

背景技术

Leber遗传性视神经病变是一种最常见的线粒体基因遗传病,以母系遗传为特征,主要引起视盘及视盘黄斑纤维视神经退行性病变。常于15-35岁发病，是迄今临床上最常见导致青壮年致盲的遗传性视神经疾病之一。不完全外显和性别偏好是该病的两大特性。

目前已知线粒体DNA(mt DNA)突变位点:G3460A，G11778A与T14484C是与LHON致病相关的三个主要的原发突变位点(占总突变的95％)，上述突变均可引起编码线粒体酶复合物I蛋白亚基结构的改变，削弱复合物I与辅酶Q之间的相互作用从而影响电子从复合物I向辅酶Q传递。

最近的研究表明，突变mtDNA的拷贝数与野生型的拷贝数比例与LHON疾病的显性率密切相关。因此进一步确定突变mtDNA拷贝数/野生型拷贝数比例，对LHON疾病严重程度的临床诊断具有重要的意义。

目前已有一些方法对对LHON mtDNA位点突变进行了筛查分析，如SSCP-PCR、RFLP-PCR以及DNA测序等等，但是存在费用昂贵、手续复杂、耗时长，且不可定量的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种定量分析Leber遗传性视神经病变突变mtDNA拷贝数的试剂盒，能够一次鉴定突变的位点，突变是纯合子还是杂合子，以及突变和正常mtDNA拷贝数。

本发明的目的是通过以下措施实现的：

一种检测Leber遗传性视神经病试剂盒，包括SEQ ID NO.1～6。本发明的设计针对LHON致病相关的三个主要的原发突变位点：G3460A，G11778A与T14484C的探针。本发明的探针片段较普通探针短，对单个碱基的识别能力更强，15-17个碱基长度的探针足够完全特异地识别单个碱基的突变；且非荧光淬灭基团本身不发出荧光，所以该探针的本底信号极弱，从而大大加强了反应的灵敏度。同时，本发明的荧光报告基团经过精心挑选，荧光信号互不干扰，可以同时进行三重荧光识别，简化了实验流程。SEQ ID NO.1～6的各条带配比可以是SEQ ID NO.1:SEQ ID NO.2:SEQ ID NO.3＝1～2:1～2:1～2,SEQ ID NO.4:SEQ ID NO.5:SEQ ID NO.6＝1～2:1～2:1～2。优选配比为SEQ ID NO.1:SEQ ID NO.2:SEQ ID NO.3:SEQID NO.4:SEQ ID NO.5:SEQ ID NO.6＝1～2:1～2:1～2:1～2:1～2:1～2。更优选配比为SEQ ID NO.1:SEQ ID NO.2:SEQ ID NO.3:SEQ ID NO.4:SEQ ID NO.5:SEQ ID NO.6＝1:2:1:1:1:2。