[发明专利]一种抑制牛骨骼肌细胞分化调控的siSIX1干扰片段及其应用

说明书

本发明涉及一种抑制牛骨骼肌细胞分化调控的siSIX1干扰片段，其序列为：正向(Sense)：CCAGUUCUCGCCUCACAAUTT；反向(Antisense)：UUAUUGCUUGUAUCCAUGGTT。该siSIX1干扰片段是根据SIX1基因CDS区域核苷酸序列全长，通过在线软件挑选可靶向沉默SIX1基因效果最好的siRNA进行合成得到，用siSIX1片段转染牛骨骼肌细胞后，骨骼肌细胞分化的标志基因肌细胞生成素(myogenin，MyoG)、肌球蛋白重链(MyHC)的mRNA水平显著下降，细胞增殖数量明显增多且骨骼肌细胞肌管融合过程明显受损。

技术领域

本发明属于分子生物学、细胞工程技术领域，具体涉及一种抑制牛骨骼肌细胞分化调控的siSIX1干扰片段及其应用。

背景技术

骨骼肌是动物躯体最重要的组成部分，占产肉动物躯体的40％，直接与动物的产肉力密切相关。秦川牛骨骼肌基本组成单位是肌纤维，其发育包括出生前肌纤维数量的增加和出生后肌纤维体积的增大，即肌细胞的形成和增殖、分化以及肌纤维形成四个步骤。肌细胞到肌纤维的形成过程及其理化性质直接影响着肉的产量和品质。因此深入了解骨骼肌细胞增殖分化过程，阐明肌细胞分化的分子机理将有助于揭示肌肉品质的决定因素。动物的骨骼肌组织形成除了与遗传、环境及营养水平等有很大关系外更多取决于基因控制。其中Homeobox超基因家族参与骨骼肌肉生长发育，在成肌肉细胞分化过程扮演着重要角色。

SIX1作为Homeobox基因家族成员之一，在细胞的增殖与分化、胚胎发育、胞外基质形成、骨的形成和重建等方面起着重要作用。

已有研究发现，敲除SIX1基因的小鼠在胚胎发育过程中骨骼肌组织形成严重受损。最新的研究表明SIX1基因可与Dusp6互作参与ERK信号通路对肌肉细胞分化起正向调控作用。同时发现在肌肉损伤后修复过程中， SIX1基因起着重要分子开关作用，而其在骨骼肌卫星细胞中的具体调控机制还不清楚。因此研究SIX1基因对骨骼肌细胞的增殖、分化过程具有重要的生理意义。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种抑制牛骨骼肌细胞分化调控的siSIX1干扰片段及其转染牛骨骼肌细胞并诱导分化的应用。

为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

一种抑制牛骨骼肌细胞分化调控的siSIX1干扰片段，其特征在于，该 siSIX1干扰片段的序列为：

正向(Sense)：CCAGUUCUCGCCUCACAAUTT；

反向(Antisense)：UUAUUGCUUGUAUCCAUGGTT。

进一步地，该抑制牛骨骼肌细胞分化调控的siSIX1干扰片段是根据 SIX1基因CDS区域核苷酸序列全长，通过在线软件挑选可靶向沉默SIX1 基因效果最好的siRNA进行合成得到，所述SIX1基因CDS区域核苷酸序列如下：