[发明专利]一种检测干血斑中尼洛替尼药物浓度的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测干血斑中尼洛替尼药物浓度的试剂盒，其特征在于，包括：内标提取试剂和干血斑校准品；

所述内标提取试剂采用同位素取代的尼洛替尼作为内标物，所述内标提取试剂的溶剂为有机溶剂与水的混合物；所述有机溶剂为甲醇、或乙腈、或甲醇与乙腈的混合液，所述有机溶剂与水的体积比为(1.5～4.0):1；

所述尼洛替尼干血斑校准品为一组具有不同浓度梯度的尼洛替尼的干血斑样本，所述干血斑样本的数量为至少6个，所述干血斑样本固定于血斑采集卡；所述浓度梯度的浓度范围为50-4000ng/mL。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括干血斑质控品；所述干血斑质控品包括至少一组具有三个不同浓度梯度的尼洛替尼的干血斑样本；所述三个不同浓度梯度的尼洛替尼的干血斑样本分别为LQC样本、MQC样本和HQC样本；其中，LQC样本中尼洛替尼浓度为100～500ng/mL，MQC样本中尼洛替尼浓度为1500～2500ng/mL，HQC样本中尼洛替尼浓度为2800～3600ng/mL。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，LQC样本中尼洛替尼浓度为150～450ng/mL，MQC样本中尼洛替尼浓度为1800～2200ng/mL，HQC样本中尼洛替尼浓度为3000～3200ng/mL。

4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述干血斑质控品包括一个空白对照干血斑质控样本，所述空白对照干血斑质控点为空白全血，其中不含有尼洛替尼。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述干血斑样本的血斑来源为兔血，兔血HCT范围为30％-45％。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述同位素取代的尼洛替尼是氢同位素取代，或碳同位素取代，或氮同位素取代。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述同位素取代的尼洛替尼为D6-尼洛替尼。

8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述尼洛替尼干血斑校准品上干血斑样本的数量为6个或7个或8个，所述干血斑样本是将血液样本点制于血斑采集卡上形成，点血体积10uL≤V≤40uL。

9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于LC-MS/MS方法检测干血斑中尼洛替尼的浓度。

10.如权利要求1-9任一项所述的试剂盒用于检测干血斑中尼洛替尼药物浓度的检测方法，包括如下步骤：

(1)样本前处理：

利用干血斑打孔器打取各干血斑校准品的样本和待检测血斑的样本，加入内标提取试剂，振荡，离心，吸取上清液，上清液再离心，再吸取上清液进LC-MS/MS进行分析检测；

(2)液相条件：

a、流动相配制

流动相A：0.1％甲酸+4mmoL甲酸胺的水溶液；流动相B：乙腈

b、液相条件：

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18，21mm×50mm，1.7μm；

梯度洗脱程序：流动相A+流动相B＝100％；0～0.35min，流动相A体积保持65.0％；0.35～1.00min，流动相A体积由65.0％递减至5.0％；1.00～1.50min，流动相A体积保持5.0％；1.50～1.51min，流动相A体积由5.0％升高至80.0％；1.51～2.30min，流动相A体积由80.0％降低至5.0％；2.30～2.60min，流动相A体积保持5.0％；2.60～2.70min，流动相A体积由5.0％升高至65.0％；2.70～3.00min，流动相A体积保持65.0％；

c、质谱条件：

离子源：ESI+；锥孔电压(V)：60；去溶剂化温度(℃)：500；去溶剂化流速(L/H)：1000；锥孔流速：150L/Hr；雾化压力：7.0Bar；

(3)结果分析：

通过各校准品标示浓度，校准品中尼洛替尼和尼洛替尼同位素内标的峰面积比值，绘制校准曲线，并拟合校准曲线方程；再将待检测血斑的尼洛替尼的峰面积与尼洛替尼同位素内标的峰面积比值，带入校准曲线方程，即可定量计算待检测血斑中尼洛替尼的浓度。