[发明专利]一种加压素[+Gly]杂质的精制方法有效
申请号: | 201910371411.4 | 申请日: | 2019-05-06 |
公开(公告)号: | CN110016070B | 公开(公告)日: | 2021-07-20 |
发明(设计)人: | 江锡铭;朱鑫磊;丁金国;黄臻辉 | 申请(专利权)人: | 上海上药第一生化药业有限公司 |
主分类号: | C07K7/16 | 分类号: | C07K7/16;C07K1/20 |
代理公司: | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人: | 薛琦;邹玲 |
地址: | 200240 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 加压素 gly 杂质 精制 方法 | ||
1.一种加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于,其包括如下步骤:采用高效液相反相色谱法将加压素[+Gly]杂质粗品溶液依次进行反相富集、反相转盐、反相纯化,即可;
所述的加压素[+Gly]杂质粗品溶液中所述的加压素[+Gly]杂质的结构式为
所述的高效液相反相色谱法的填料为超耐水填料;所述的超耐水填料为ODS-AQ超耐水填料;
所述的反相富集、反相转盐、反相纯化均是在一步的反相洗脱过程中完成;所述的反相富集、反相转盐、反相纯化的条件如下:
收集保留时间为75~85min的洗脱液即得到加压素[+Gly]杂质溶液;
所述的流动相A为体积百分比为0.005~0.1%的乙酸/水溶液,所述的流动相B为体积百分比为0.005~0.1%的乙酸/乙腈,所述的样品C1为所述的加压素[+Gly]杂质粗品溶液,所述的流动相C2为5~50mM NH4Ac-NH4OH水溶液,所述的流动相C2的pH为7.0~9.0,所述的洗脱液的流速为80~100mL/min。
2.如权利要求1所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:在20~21min期间,将所述的洗脱液由所述的样品C1更换为所述的流动相C2;在41~42min期间,将所述的洗脱液由所述的流动相C2更换为所述的流动相A。
3.如权利要求1所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:洗脱步骤(4)和(5)中,所述的洗脱液的转换速率是一个匀速变化的过程。
4.如权利要求1所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:所述的加压素[+Gly]杂质粗品溶液为采用固相合成法制得的还原型加压素[+Gly]杂质粗品先经过溶解、稀释为还原型加压素[+Gly]杂质粗品溶液,再将所述的还原型加压素[+Gly]杂质粗品溶液经氧化过程而得。
5.如权利要求4所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:所述的还原型加压素[+Gly]杂质粗品溶液浓度为0.1~4mg/mL。
6.如权利要求5所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:所述的还原型加压素[+Gly]杂质粗品溶液浓度为0.5~2mg/mL。
7.如权利要求1所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:所述的加压素[+Gly]杂质粗品溶液中所述的加压素[+Gly]杂质的HPLC纯度为60%~85%。
8.如权利要求7所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:所述的加压素[+Gly]杂质粗品溶液中所述的加压素[+Gly]杂质的HPLC纯度为70%~80%。
9.如权利要求1所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:所述的加压素[+Gly]杂质粗品溶液中,溶剂为含三氟乙酸和乙酸的水溶液。
10.如权利要求1所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:所述的超耐水填料的孔径为7~10nm,所述的超耐水填料的粒径为10μm。
11.如权利要求1所述的加压素[+Gly]杂质的精制方法,其特征在于:所述的流动相A为体积百分比为0.02~0.05%的乙酸/水溶液;
和/或,所述的流动相B为体积百分比为0.02~0.05%的乙酸/乙腈;
和/或,所述的流动相C2为10~20mM NH4Ac-NH4OH水溶液;
和/或,所述的流动相C2的pH为7.5~8.5;
和/或,所述的高效液相反相色谱法的检测波长为220nm。
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