[发明专利]一种加压素的精制方法

说明书

本发明公开了一种加压素的精制方法，该精制方法包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法将加压素粗品溶液依次进行反相富集、反相转盐、反相纯化，即可；加压素粗品溶液为固相合成的还原型加压素粗品溶液经氧化后而得；高效液相反相色谱法的填料为超耐水填料。本发明运用了在线反相富集、反相转盐、反相纯化一步法制得多肽纯品，加压素粗品中杂质的去除率较高，得到加压素纯品的纯度更高，优化了生产工艺，其中，柱平衡、上样富集和转盐阶段的流动相为水溶液，环保无污染，流出的废液可直接进行污水处理并回收利用。

技术领域

本发明涉及一种加压素的精制方法。

背景技术

加压素是由九个氨基酸残基组成的合成多肽，其化学结构为加压素的理论分子量1084.24。属于神经垂体激素，又叫血管升压素或后叶加压素，它有两种受体V1和V2。V1主要分布在血管平滑肌细胞膜上，通过受体-G蛋白-第二信使途径发挥作用，使血管收缩，血压升高。V2在肾脏远端小管和集合管上皮细胞，生理剂量可以促进肾脏远端小管和集合管对水的重吸收，发挥抗利尿作用。

目前已上市多肽药物常见的纯化方法大都采用了制备型高效液相色谱法，该法是获得高纯度多肽目标分子的最有效的方法。一般多肽药物纯化制备工艺设计是先中低压色谱富集目标多肽，然后高压色谱精制，但是考虑到目标多肽加压素分子量约1kDa，无合适的分子筛凝胶柱(其上样量小，流速低，处理量小，比较适合分子量大于10kDa蛋白的脱盐)或超滤膜选择。而且中低压色谱中常用的分离方法有分子筛色谱法、离子交换色谱法和疏水相互作用色谱法，这些色谱方法中用到的填料的粒径通常从几十微米到几百微米不等，空隙尺寸多为几百纳米不等，无法得到高纯度的目标多肽。采用固相合成+稀释环化得到的加压素粗品溶液浓度均比较稀，采用一般的反相色谱柱进行纯化，仅上样的过程中就产生大量的有机废液，危废的处理费用很高。现在还缺乏一种有效的制备多肽盐原料药的方法，因此仍然迫切需要开发新的适合纯化低浓度多肽及盐的经济有效的工艺。

中国专利文献CN106518975A公开了一种加压素的制备方法。该制备方法包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法将加压素前体粗品溶液依次进行反相环化、反相纯化、反相脱盐，即可；高效液相反相色谱法的填料为苯乙烯-二乙烯基苯共聚物；所述的加压素前体粗品为含两游离巯基的加压素前体粗品。该专利的制备工艺中采用还原型的加压素前体粗品为起始原料，粗品中杂质的去除率较低为14.3％，且流动相中使用NaOH作为碱性物质，对pH的控制不利，可能对产品的稳定性造成影响。另外，该方法在色谱柱上进行环化时需大量含有机溶剂的流动相，在纯化和转盐步骤中也产生了大量的有机危废液，后续废液的处理成本较大且难以回收利用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于为了克服现有技术中精制加压素时，加压素粗品溶液中杂质的去除率较低，且产生的有机危废液量大，造成的废液处理成本大，不经济的缺陷，而提供了一种加压素的精制方法。本发明的精制加压素的方法在纯化目标产物的过程中产生的废液大部分为废水可经污水处理可直接回用，经济环保，加压素粗品中杂质的去除率更高，得到加压素纯品的纯度更高。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本发明提供了一种加压素的精制方法，其包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法将加压素粗品溶液依次进行反相富集、反相转盐、反相纯化，即可；所述的高效液相反相色谱法的填料为超耐水填料；

所述的反相富集、反相转盐、反相纯化均是在一步的反相洗脱过程中完成，所述的反相富集、反相转盐、反相纯化的条件如下：

其中流动相A为体积百分比为0.005～0.1％的乙酸/水，流动相B为体积百分比为0.005～0.1％的乙酸/乙腈，样品C1为所述的加压素粗品溶液，流动相C2为5～50mM NH₄Ac-NH₄OH水溶液，所述的流动相C2的pH为7.0～9.0，洗脱液的流速为80～100ml/min；