[发明专利]一种基因修饰的免疫细胞及其制备方法和应用有效
申请号: | 201910372692.5 | 申请日: | 2019-05-06 |
公开(公告)号: | CN110055224B | 公开(公告)日: | 2023-06-30 |
发明(设计)人: | 请求不公布姓名 | 申请(专利权)人: | 深圳市体内生物医药科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02;A61P31/18 |
代理公司: | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人: | 巩克栋 |
地址: | 518102 广东省深圳市*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基因 修饰 免疫 细胞 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种免疫细胞,其特征在于,所述免疫细胞过表达HIL-6或L-GP130;
所述HIL-6的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示;
所述L-GP130的氨基酸序列如SEQ ID NO: 3所示;
所述免疫细胞为T细胞;
所述免疫细胞修饰有一种或者两种以上的CAR分子。
2.根据权利要求1所述的免疫细胞,其特征在于,所述HIL-6的核酸序列如SEQ ID NO:2所示;
所述L-GP130的核酸序列如SEQ ID NO: 4所示。
3.根据权利要求1所述的免疫细胞,其特征在于,所述T细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD8+T细胞、NKT细胞或γδT细胞中的任意一种或至少两种的组合。
4.根据权利要求3所述的免疫细胞,其特征在于,所述T细胞为CD4+T细胞、CD8+T细胞或CD4+CD8+T细胞。
5.根据权利要求4所述的免疫细胞,其特征在于,所述CAR分子的胞外scFv序列识别抗原为CD19、MUC1或GPC3中的任意一种;
其中抗CD19 CAR的scFv1的氨基酸序列如SEQ ID NO: 5所示,核酸序列如SEQ ID NO:6所示;
其中抗CD19 CAR的scFv2-7的氨基酸序列如SEQ ID NO: 7-12所示;
其中抗GPC3 CAR的scFv的氨基酸序列如SEQ ID NO: 13所示,核酸序列如SEQ ID NO:14所示。
6.根据权利要求4所述的免疫细胞,其特征在于,所述CAR分子的胞内共刺激信号传导结构域包括CD28、4-1BB、TLR2或DAP10中的任意一种或至少两种分子的胞内结构域组合;
所述TLR2的氨基酸序列如SEQ ID NO: 23所示,核酸序列如SEQ ID NO: 24所示;
所述4-1BB的氨基酸序列如SEQ ID NO: 25所示,核酸序列如SEQ ID NO: 26所示;
所述CD28的氨基酸序列如SEQ ID NO: 27所示,核酸序列如SEQ ID NO: 28所示;
所述DAP10的氨基酸序列如SEQ ID NO: 31所示,核酸序列如SEQ ID NO: 32所示;
所述CAR分子的信号肽的核酸序列如SEQ ID NO: 33所示;
所述CAR分子的跨膜区的核酸序列如SEQ ID NO: 34所示;
所述CAR分子的CD3ζ的核酸序列如SEQ ID NO: 35所示。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的免疫细胞的制备方法,其特征在于,所述方法包括将HIL-6或L-GP130过表达于免疫细胞中。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述过表达包括持续性过表达和/或条件性诱导过表达。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述过表达为条件性诱导过表达;
所述条件性诱导过表达包括CAR识别激活诱导过表达和/或外源化合物诱导过表达。
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