[发明专利]灵芝多糖在家畜精液冷冻长期保存中的应用

说明书

本发明公开了一种在家畜精液冷冻保存中应用的保护剂，该保护剂能显著提高家畜精子的存活率，其主要物质是灵芝多糖。本发明主要创新是在国内外首次将灵芝多糖作为保护剂，用于猪、羊和牛细管冷冻精液长期保存、人工授精及精液超低温冷冻后的长途运输后输精，可显著提高冷冻‑解冻后猪、羊和牛精子活率、顶体完整率和质膜完整率。

技术领域

本发明属于哺乳动物精液的超低温冷冻保存技术领域，具体涉及灵芝多糖作为抗冻保护剂在家畜精液冷冻保存中的应用。

背景技术

精子冷冻技术是人工授精的重要革新，不仅解决了雄性动物精液的长期保存问题，便于保存遗传资源，而且应用方便，不受时间及空间的限制，在开展省际、国际之间畜牧业的协作，在建立全球优良物种基因库等方面起到重要作用。精子冷冻技术的广泛应用，有利于提高优秀种公畜的利用率，减少公畜的饲养量，减少经济成本，提高了畜牧业效益，尤其在人工授精领域方面起到重要的作用。精液冷冻技术对我国及国际的畜牧业可持续发展和畜产品的满足供应具有重要现实意义。

精子对温度变化比较敏感，在冷冻降温的过程中，精子容易遭受冷冻损伤，主要包括物理性损伤、化学性损伤和氧化性损伤。跟新鲜精液相比，冷冻-解冻后的精子，其活率、顶体完整率、线粒体活性、DNA完整率和膜完整率显著下降。而精子质量的好坏，与妊娠率、分娩率和窝产仔数密切相关。目前为止，冷冻精液人工授精技术已经应用于养牛生产，在奶牛繁殖和改良方面应用最为普及。但冷冻解冻后，依然有40％-50％精子失去活性，严重降低了良种公牛的利用率。而猪精子和羊精子对于冷冻刺激更为敏感，解冻后精子复苏率低，异常精子多，受胎率低于正常受胎率，故猪精子和羊精子冷冻还处于试验阶段。

灵芝是一种重要的中药材，属多孔菌科类真菌，灵芝多糖中除含有葡萄糖外，大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖多糖的药理活性与单糖间糖苷键的结合形式有关。单糖间以β-1,3、1,6或β-1,4、1,6-糖苷键连接是有效的即具有药理活性，而纯β-1,4-糖背键连接的则没有药理活性。灵芝多糖是灵芝中的一种重要的活性物质，前人研究表明，具有免疫调节、抗肿瘤和抗衰老等生物活性。

由于灵芝多糖具有特有的生理活性和临床作用，且安全无毒，可广泛应用于医药、食品和化妆品行业。基于灵芝多糖可提高机体免疫力，在癌症病人经放疗、化疗机体免疫力受损的情况下，与放疗、化疗配合可达到治愈疾病的目的。另外，灵芝多糖还可抑制过敏反应介质的释放，从而阻断非特异性反应的发生，因此又可抑制手术后癌细胞复发和转移。已投入使用的灵芝制剂有片剂、针剂、冲剂、口服液、糖浆剂和酒剂等，均取得了一定的临床疗效。灵芝多糖作为功能因子可制成保健食品，也可作为食品添加剂加入饮料、糕点、口服液中，这些都极大地丰富了食品市场。

关于灵芝多糖作为家畜精液冷冻保护剂用于猪、羊和牛等家畜精子冷冻长期保存，甚至任何哺乳类精液冷冻保存的研究，直到目前为止，国内外未查阅到相关报道。所以，本研究通过大量反复试验和剂量冷冻筛选，发现了灵芝多糖在家畜精液冷冻保护中，特别在猪、羊和牛等家畜精子冷冻保存后，可明显提高了冷冻后精子活率和膜完整性等。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供一种家畜精液冷冻保护剂、以及其在猪、羊和牛精液冷冻保存中的应用，解决了现有技术家畜精子冷冻-解冻后活率较低的问题。

为解决上述不足，本发明采用的技术方案如下：

灵芝多糖在家畜精液冷冻保存中的应用。所述家畜精液冷冻保护剂主要是灵芝多糖。

其次冷冻过程中，需要的常规冷冻基础液、鸡蛋黄和甘油等。特别要强调的是上述的家畜精液冷冻保存剂中添加甘油的量体积比为6％-12％。

以灵芝多糖作为主要冷冻保护剂，冷冻过程中，需要完全溶解于常规冷冻基础液的配方中(葡萄糖1.1g，柠檬酸1.48g，Tris2.42g，青霉素钠0.06g，硫酸链霉素0.1g，双蒸水100mL)。