[发明专利]一种SIRT1激活剂的制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种SIRT1激活剂的制备方法与应用，金荞麦提取物的制备：将金荞麦根茎切片后和清水一起浸泡，密封好之后隔水蒸煮3h，将获得的药液冷却，滤液以0.45μm滤膜滤过，将滤液冷冻干燥即得金荞麦提取物，将冷冻干燥的金荞麦提取物溶解在二甲基亚砜DMSO中；加到培养基有效促进SIRT1蛋白表达，有效减轻氯化锑的细胞毒性，抑制氯化锑介导的BEAS‑2b细胞活力丢失和凋亡。

技术领域

本发明涉及环境科学技术领域，尤其涉及一种SIRT1激活剂的制备方法与应用。

背景技术

金荞麦来源于蓼科植物金荞麦Fagopyrum dihotrys (D. Don) Hara的干燥根茎，收载于《中国药典》2015年版一部，具有清热解毒、排脓祛瘀的功效，用于肺痈吐脓，肺热喘咳等症。

锑(Antimony, Sb)是一种资源有限的有色金属，被广泛应用于橡胶、陶瓷、搪瓷、半导体原件、颜料、、塑料、医药、玻璃、电池、油漆、烟火材料、合金及阻燃剂等领域。我国是锑资源最丰富的国家，占世界总储量的66.2%，2010 年中国矿锑产量（18.74万吨）占世界总产量的 89.33%，这意味着我国正承担着锑矿开采与加工带来的严重的环境风险。大量城市废物和煤炭燃烧是造成自然环境锑污染的主要来源，锑是空气颗粒物（雾霾的主要诱因）中的主要金属成分；而锑矿开采和冶炼过程中吸入大量锑及其化合物是职业环境的主要暴露方式。由于呼吸道暴露是锑的主要暴露途径，因此肺毒性效应和机制研究是锑毒理学研究的关键内容，揭示锑的肺毒性机制为干预其肺损伤提供理论基础。我之前的文章表明，氯化锑可以促进SIRT1蛋白质降解，抑制SIRT1的基因转录，两者均导致SIRT1蛋白表达下调，从而引起肺泡上皮细胞凋亡。基因手段过表达SIRT1或者采用白藜芦醇（一种公认的SIRT1激活剂，sigma公司购买）可以促进SIRT1表达，抑制氯化锑的细胞毒性。

在1986年Ivy等人在酵母菌发现一个与长寿相关的基因，称之为沉默信息调节因子2（Sirt2），随后几年，陆续在哺乳动物中找到一系列Sirt2的同源蛋白，命名为SIRT1-SIRT7，其中SIRT1和酵母的Sirt2同源性最高。SIRT1作为细胞内重要的调节因子，广泛分布于人类多种细胞的胞浆和胞核，参与调节炎症、细胞周期、衰老和凋亡、应激等重要生理过程。研究发现，SIRT1的表达下调与多种肺部疾病的发生发展有关。白藜芦醇是SIRT1的一种天然激动剂，它对多种肺损伤具有重要的保护作用，同时也是目前最常用的SIRT1激动剂。

发明内容

本发明提供一种SIRT1激活剂的制备方法与应用，解决现有技术中的目前商品化的白藜芦醇价格比较高、本身具有一定细胞毒性等技术问题。

本发明采用以下技术方案：一种SIRT1激活剂的制备方法，步骤为：

第一步，金荞麦提取物的制备：将金荞麦根茎切片后和清水一起浸泡，密封好之后隔水蒸煮3-4小时，将获得的药液冷却，滤液以0.45μm滤膜滤过，将滤液冷冻干燥即得金荞麦提取物；

第二步：将冷冻干燥的金荞麦提取物溶解在二甲基亚砜中，得细胞处理物的存储母液，在1.5mL的EP管里用枪头吹打5-10次助溶；

第三步：将细胞处理物的母液进行分装，然后放-20度冰箱保存，得SIRT1激活剂。

作为本发明的一种优选技术方案：第一步中金荞麦根茎切片和清水一起浸泡具体条件为取1千克金荞麦根茎切片，加清水过药面，浸泡一夜，第二天，加5倍于浸泡水体积的水密封好之后隔水蒸煮。

作为本发明的一种优选技术方案：第一步中隔水蒸煮条件为先用武火煎煮半小时，然后改文火继续加热，维持3小时后关火。

作为本发明的一种优选技术方案：一步中药液冷却前条件为自然冷却到室温。