[发明专利]一种具有类白细胞介素-2功能的牡蛎多肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种具有类白细胞介素2功能的牡蛎多肽及其制备方法和应用，特点是该牡蛎多肽结构式为I‑LADSAP‑R，其制备方法为将牡蛎样品洗净、沥干，然后捣碎磨成匀浆，按照固液质量比1：9的比例加入水，调节pH为7，加入碱性蛋白酶酶解后灭活取上清液，利用1KDa膜超滤，分子量小的液体浓缩后用MALDI‑TOF/TOF系统分析多肽组成和种类，将获得的优势多肽运用DS进行模拟筛选与分子对接，筛选得到和靶标蛋白白细胞介素‑2结合具有非键相互作用的多肽I‑LADSAP‑R，优点是具有类白细胞介素‑2功能，对B16细胞的增殖具有明显的抑制作用，并对辅助性T细胞具有增强作用以及对细胞毒性T细胞具有抑制作用。

技术领域

本发明涉及一种牡蛎酶解多肽，尤其是涉及一种具有类白细胞介素-2功能的牡蛎多肽及其制备方法和应用。

背景技术

牡蛎俗称海蛎子、蚝等，隶属软体动物门，双壳纲，珍珠贝目，是世界上第一大养殖贝类，是人类可利用的重要海洋生物资源之一。牡蛎不仅肉鲜味美，营养丰富，而且具有独特的保健功能和药用价值，是一种营养价值很高的海产珍品。

海洋生物活性物质中肽类是数量最庞大的一类化合物，达数万种之多，包括海洋肽类毒素与海洋生物活性肽等。现已证明，很多海洋肽类具有抗肿瘤、抗艾滋病、抗真菌、抗病毒及免疫调节等生理活性，但关于牡蛎肽的功能研究却较少，且主要集中在抗氧化、抗衰老和降血糖等基础常见功能方面。2012年，长牡蛎全基因组序列的公布，为牡蛎肽的应用提供了有效的契机。从基因组信息出发，了解牡蛎多肽的序列结构，并通过高通量筛选预测和验证特定序列多肽的功能，将会有效改善传统多肽研究费时费力、目标不明确、具有一定随机性的弊端，对推动我国海洋产业的迅速发展也具有极其重要的现实意义。

常见的分子模拟的软件包括Amber、Gromacs、Namd和Discovery Studio等多种，其中Discovery Studio（药物发现与生物大分子计算模拟平台，简称 DS），是面向生命科学领域的新一代分子建模和模拟环境的软件，主要应用于蛋白质结构功能研究以及药物发现。DS软件目前已经成功应用于蚕蛹蛋白、烟酸姜黄素酯和芹菜素等多种活性物质的预测，发现了蚕蛹蛋白中含有ACE抑制肽、烟酸姜黄素酯抗动脉粥样硬化的作用靶点和芹菜素的作用靶标。DS以理论方法为基础，通过与计算机结合的方式来模拟出化合物的分子结构，然后模拟出相应分子体系之间作用机制，最后根据计算分析来解释和预测实验结果的方法，是一种理想的利用序列信息，基于分子间相互作用，实现小分子功能预测的软件。活性多肽是一类相对分子质量小于6000Da的分子，满足DS预测的要求，因此可以利用DS来完成多肽分子的功能预测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种对B16细胞的增殖具有明显的抑制作用，并对辅助性T细胞具有增强作用以及对细胞毒性T细胞具有抑制作用的具有类白细胞介素-2功能的牡蛎多肽及其制备方法和应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

1、一种具有类白细胞介素-2功能的牡蛎多肽，所述的牡蛎多肽氨基酸序列结构如下：I-LADSAP-R。

2、一种具有类白细胞介素-2功能的牡蛎多肽的制备方法，包括以下步骤：将牡蛎样品洗净、沥干，然后捣碎磨成匀浆，按照固液质量比1：9的比例加入水，调节pH为7，加入3.35wt%的碱性蛋白酶，在温度为53.95℃下恒温酶解3.14 h，酶解好后在100℃条件下水浴灭活酶10 min，酶解液在4500 r/min条件下离心15 min，取上清液用1KDa膜进行超滤，滤液浓缩后利用MALDI-TOF/TOF系统分析上清液中多肽组成和丰度，将获得的多肽氨基酸序列运用药物发现与生物大分子计算模拟平台（DS）进行模拟筛选与分子对接，筛选得到和靶标蛋白白细胞介素-2结合具有非键相互作用的多肽I-LADSAP-R，按照氨基酸组成人工合成多肽，即得到具有类白细胞介素-2功能的牡蛎多肽。

3、上述具有类白细胞介素-2功能的牡蛎多肽在制备抑制小鼠黑色素瘤细胞（B16）增殖的药物方面的用途。