[发明专利]精神分裂症小鼠模型海马mRNA序列分析及试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及精神分裂症神经发育小鼠模型海马生物标记物、检测方法及试剂盒。本发明提供：①一种精神分裂症神经发育小鼠模型海马生物标记物，为mRNA1、mRNA2、mRNA5、mRNA10，上述标记物的检测方法以及检测试剂盒；②一种精神分裂症神经发育小鼠模型海马干预的生物标记物，为mRNA10，上述标记物的检测方法以及检测试剂盒；③提供mRNA10的mRNA信号通路‑靶基因网络图及GO/KEGG富集分析结果。本发明的有益效果在于首次提供了精神分裂症神经发育小鼠模型及干预的生物标记物，并首次发现其海马mRNA具有表达水平差异性，该变化可被奥氮平干预逆转，这对于揭示精神分裂症病理机制及精神分裂症治疗靶点的探讨具有启示意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是一种精神分裂症小鼠模型海马mRNA序列分析及试剂盒。

背景技术

精神分裂症(schizophrenia,SZ)是重性精神病，影响着全球1％的人口，终生患病率为0.3％-0.7％，有5％-6％的患者最终死于自杀，有20％的患者有自杀意念或行为，患者可出现幻觉、妄想、情感淡漠、社交退缩等典型精神症状，自知力丧失或不完整，造成严重的认知、情感、行为等心理社会功能损害；该病可隐匿起病、病程潜隐、预后不良、反复发作，主要起病于青壮年，症状表现、预后等均存在较大的个体间变异性。

从现有的研究看，遗传在精神分裂症病理机制、病理过程中发挥重要的作用，最近几年研究者发现，信使核糖核酸(Messenger RNA，mRNA)在精神疾病病理机制中发挥调控作用，mRNA存在于原核和真核生物的细胞质及真核细胞的某些细胞器中，mRNA是由DNA的一条链作为模板转录而来的、携带遗传信息的能指导蛋白质合成的一类单链核糖核酸，其携带遗传信息，在蛋白质合成时充当模板。mRNA的复制，转录和翻译由一个DNA分子，边解旋，边转录，利用细胞核内部的游离核糖核苷酸和成其需要的碱基，规则遵循碱基互补配对原则。mRNA从5′末端到3′末端的结构依次是5′帽子结构，5′末端非编码区，决定多肽氨基酸序列的编码区，3′末端非编码区，和多聚腺苷酸尾巴。多聚腺苷酸尾一般由数十个至一百几十个腺苷酸连接而成。随着mRNA存在时间的延续，这段聚A尾巴慢慢变短。因此，目前认为这种3′末端结构可能与增加转录活性以及使mRNA趋于相对稳定有关。

精神分裂症是神经发育性障碍，对大脑组织mRNA表达水平及干预效果评估有利于进一步揭示mRNA在精神分裂症中的调控机制及治疗靶点。但是，受制于生命伦理学的限制，基于人类精神分裂症活体脑组织的采集难以开展，最近，进行精神分裂症神经发育小鼠模型受到研究者重视，目前已有成熟的理论基础、建模标准和检测指标，在机理有效性、表观遗传有效性和预测有效性方面有明显的优势。因此，本发明意在探讨精神分裂症神经发育小鼠模型海马mRNA表达水平、检测方法及试剂盒。

发明内容

为了克服现有的现有技术的不足，本发明提供了一种精神分裂症小鼠模型海马mRNA序列分析及试剂盒。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种精神分裂症神经发育小鼠模型海马生物标记物，所述标记物为mRNA1、mRNA2、mRNA5、mRNA10。

一种精神分裂症神经发育小鼠模型海马生物标记物的检测方法，包括以下步骤：

脑组织采集，对照组(NC)、精神分裂症模型组(SZ)、治疗组(Treated)三组小鼠均于100天断头处死并剥离全脑；

RNA抽提、建库提取样品总RNA，并使用试剂盒ribo-zero消化核糖体RNA后；加入打断试剂将RNA打断成短片段，以打断后的RNA为模板,用六碱基随机引物合成一链cDNA，然后配制二链合成反应体系合成二链cDNA，在cDNA二链合成时以dUTP代替dTTP,然后连接不同接头，再利用UNG酶法将含有dUTP的一条链进行消化，只保留连接链不同接头的cDNA一链；使用试剂盒纯化cDNA一链；纯化的cDNA一链再进行末端修复、加A尾并连接测序接头，然后进行片段大小选择，最后进行PCR扩增；