[发明专利]运用硅藻土澄清细胞发酵液的方法

说明书

本发明提供一种运用硅藻土澄清细胞发酵液的方法，包括步骤：步骤一，将细胞发酵液与硅藻土充分混合均匀，静置3‑5分钟；步骤二，将步骤一中的混合物倒入真空过滤器的滤杯，进行真空抽滤，收集滤液。本发明通过在细胞发酵液中加入适量的硅藻土，增加发酵液的通透性，实现快速高效的发酵液澄清。且在不影响产物纯度、收率、糖基化类型等品质的情况下，更加节约成本、环保。

技术领域

本发明涉及生物领域，特别是涉及运用硅藻土澄清细胞发酵液的方法。

背景技术

细胞培养液经过一段时间的摇床培养，出现大量代谢产物，称为细胞发酵液。目前的蛋白质药物多数是通过哺乳动物细胞表达，尤其是在药物前期研发阶段，需要进行大量的备选蛋白质表达筛选。由于所需蛋白为分泌型蛋白，蛋白质会分泌到细胞培养液中，因此在进行蛋白质纯化前，需要对细胞发酵液进行澄清，去除培养液中的残余细胞和细胞碎片，以便于后续通过液相色谱进行蛋白质纯化。

目前澄清细胞发酵液常用的做法是通过离心、过滤去除细胞和细胞碎片。而离心步骤的准备工作包括：首先，将离心机专用的离心杯用0.5M NaOH浸泡处理30分钟以上，以防污染，再用超纯水将NaOH清洗干净备用。然后将发酵液倒入准备好的离心杯中，并使每个离心杯的重量相同。按照常用的离心条件，每台离心机一次可以离心6个离心杯的量，处理量约为6L，调节目标转速10,000g，需时30分钟。离心结束后，取出发酵液进行过滤，1L样品通常需要使用2个滤杯才能过滤完全。

现有的澄清方法有以下缺点：1、操作复杂繁琐，且涉及强碱操作，具有一定的危险性；2、离心杯每次使用都需要进行清洗，增加了操作步骤，且由于离心机转速达10,000g，高转速影响离心杯的使用寿命，有一定破碎的风险，因此需要经常换新，然而离心杯价格昂贵，增加了生产成本；3、样品转移过程中易发生两个样品混淆的情况，离心过程中易发生离心杯破碎，则样品需要重新发酵，增加生产时间和成本；4、离心耗时长，且处理量小，因此限制了高通量处理；5、离心方法对蛋白质和细胞碎片的分离效果欠佳，增加了过滤的时间和所需耗材成本；6、离心机属于大型设备，采购费用高，操作过程中易损坏，维护成本高。

发明内容

本发明提供一种运用硅藻土澄清细胞发酵液的方法，其主要目的在于提供一种操作更加快速、高效、简便，效果佳的澄清方法，作为现有离心澄清方法的替代。

为达前述目的，本发明提供一种运用硅藻土澄清细胞发酵液的方法，包括步骤：

步骤一，将细胞发酵液与硅藻土充分混合均匀，静置3-5分钟；

步骤二，将步骤一中的混合物倒入真空过滤器的滤杯，进行真空抽滤，收集滤液；

具体的，所述硅藻土符合国家标准，二氧化硅含量大于90％，细度为200-300目，内毒素含量小于1EU/g，渗透率0.2-5D(达西)。

所述硅藻土加入的量是根据细胞类型和细胞密度加入相应重量的所述硅藻土，对于3x10⁶-8x10⁶个/升的细胞密度，硅藻土的用量为30g/L-50g/L。

作为一个具体的实例，对于细胞类型为CHO(Chinese hamster ovary cell)细胞，密度为3x10⁶-8x10⁶个/升的细胞发酵液，按40g/L加入所述硅藻土。

作为一个具体的实例，对于细胞类型为293细胞，密度为3x10⁶-8x10⁶个/升的细胞发酵液，按45g/L加入所述硅藻土。

具体的，所述真空过滤器装有0.22μm PES膜。

具体的，所述真空抽滤的压力为0.2-0.5bar。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：