[发明专利]醛酮还原酶BmAKR2及其突变体和应用

权利要求书

1.醛酮还原酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的醛酮还原酶的突变体，其特征在于，该突变体氨基酸序列具有与SEQ ID NO.2氨基酸序列至少有75％序列同一性，并且其24位或111位突变，或其24位和111位同时突变。

3.如权利要求2所述的醛酮还原酶的突变体，其特征在于，所述的醛酮还原酶的24位突变为体积较小的氨基酸残基，111位突变为体积较大的氨基酸残基，所述的体积较小氨基酸残基为Ala、Val、Ile、Ser、Thr与Leu，优选为Ser；体积较大的氨基酸残基为Pro、Phe、Try、Leu，优选为Phe。

4.如权利要求2或3所述醛酮还原酶的突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4，6，8所示。

5.一种核酸，其能够编码权利要求2-4中任一项所述的醛酮还原酶突变体。

6.如权利要求5所述的核酸，其核酸序列如SEQ ID NO.3，5，7所示。

7.一种表达载体，该载体含有权利要求5或6所述的核酸且能在宿主细胞中进行表达。

8.一种宿主细胞，其含有权利要求5或6的核酸或权利要求7所述的表达载体，所述的宿主细胞优选为大肠杆菌。

9.权利要求1所述的醛酮还原酶或权利要求2-4中任一项所述的醛酮还原酶突变体在还原α-酮酸酯类化合物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的还原方法为：在pH 5-7的磷酸盐缓冲液溶液中，在葡萄糖脱氢酶，葡萄糖和NADP⁺存在下，在权利要求1所述的醛酮还原酶或权利要求2-4任一项所述的醛酮还原酶突变体的催化下，对α-酮酸酯类化合物进行还原，生成光学活性手性仲醇，优选地，醛酮还原酶用量为0.02-40g/L，葡萄糖脱氢酶用量为0.01-5g/L，葡萄糖用量为6-200g/L，NADP⁺用量为0.1-0.5mmol，底物浓度为3-100g/L，所述缓冲液为pH5-7的磷酸盐缓冲液，反应温度是30-40℃。

11.如权利要求10所述的应用，其特征在于，所述的α-酮酸酯类化合物如式(I)所示:

(I)

其中R₁为C1-C4烷基，苯基或者带有取代基的苯基；苯基的取代基为C1-C4烷基；

R₂为C1-C4烷基。

优选地，

R₁为苯基；

R₂为甲基。