[发明专利]一种缩宫素[4-Glu,5-Asp]杂质的精制方法

说明书

本发明公开了一种缩宫素[4‑Glu,5‑Asp]杂质的精制方法，该精制方法包括下述步骤：采用高效液相反相色谱法将缩宫素[4‑Glu,5‑Asp]杂质粗品溶液依次进行反相富集、反相转盐、反相纯化，即可；缩宫素[4‑Glu,5‑Asp]杂质粗品溶液为固相合成的还原型缩宫素[4‑Glu,5‑Asp]杂质粗品溶液经氧化后而得；高效液相反相色谱法的填料为超耐水填料。本发明运用了在线反相富集、反相转盐、反相纯化一步法制得多肽纯品，粗品溶液中杂质的去除率较高，优化了生产工艺，其中柱平衡、上样富集和转盐阶段的流动相为水溶液，环保无污染，流出的废液可直接进行污水处理并回用。

技术领域

本发明涉及一种缩宫素[4-Glu,5-Asp]杂质的精制方法。

背景技术

缩宫素，又称催产素，英文名为Oxytocin，结构式：

分子式为：C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂，分子量为1007.2

缩宫素用于引产、催产、产后及流产后因宫缩无力或缩腹不良而引起的子宫出血；了解胎盘储备功能(催产素激怒试验)；滴鼻可促使排乳。缩宫素能间接刺激子宫平滑肌收缩，模拟正常分娩的子宫收缩作用，导致子宫颈扩张，子宫对缩宫素的反应在妊娠过程中逐渐增加，足月时达高峰。缩宫素也可刺激乳腺的平滑肌收缩，有助于乳汁自乳房排出，但并不增加乳腺的乳汁分泌量。

就一个药品而言，其中所含的少量杂质是引发药品副作用最重要的原因，因此对其纯度的检查是保证药品安全有效性的重要基础之一，而纯度检查的内容，根据各个药物的性质和特点有些不同，但基本上均要涉及各自的“有关物质”检查研究。合成多肽的有关物质主要来自合成过程中的工艺杂质和由于多肽不稳定而产生的降解产物、聚合物等杂质，尽管目前合成多肽的纯化工艺已经有了很大进步，但工艺杂质仍是合成多肽有关物质的重要来源，这主要是由于合成多肽的一些工艺杂质如缺失肽、断裂肽、氧化肽、二硫键交换的产物等与药物本身的性质可能非常近似，从而给纯化造成了一定的难度。研究表明合成多肽中最常见的降解产物是脱酰胺产物、氧化产物、水解产物。在组成多肽的各种氨基酸中，尤其是在pH值升高和高温条件下，天冬酰胺、谷胺酰胺和肽链C段酰胺易于发生脱酰胺反应。

目前已上市多肽药物常见的纯化方法大都采用了制备型高效液相色谱法，该法是获得高纯度多肽目标分子的最有效的方法。一般多肽药物纯化制备工艺设计是先中低压色谱富集目标多肽，然后高压色谱精制，但是考虑到目标多肽缩宫素分子量约1kDa，无合适的分子筛凝胶柱(其上样量小，流速低，处理量小，比较适合分子量大于10kDa蛋白的脱盐)或超滤膜选择。而且中低压色谱中常用的分离方法有分子筛色谱法、离子交换色谱法和疏水相互作用色谱法，这些色谱方法中用到的填料的粒径通常从几十微米到几百微米不等，空隙尺寸多为几百纳米不等，无法得到高纯度的目标多肽。采用固相合成+稀释环化得到的缩宫素粗品溶液浓度均比较稀，采用一般的反相色谱柱进行纯化时，仅上样的过程中就产生大量的有机废液，危废的处理费用很高。现在还缺乏一种有效的制备多肽盐原料药的方法，因此仍然迫切需要开发新的适合纯化低浓度多肽及盐的经济有效的工艺。