[发明专利]一种组培大豆种子的消毒方法

说明书

本发明公开了一种组培大豆种子的消毒方法，包括清洗、酒精消毒、过氧化氢消毒、无菌水浸泡的过程。本发明利用一定浓度的过氧化氢代替常规的升汞、次氯酸钠等消毒方法，降低了对环境的污染，节省了消毒的时间，而且，促进了种子的萌发，使无菌苗的获得时间缩短，降低了种子受污染的几率。

技术领域

本发明涉及种子消毒技术领域，更具体地说是涉及一种组培大豆种子的消毒方法。

背景技术

大豆是我国重要的经济作物和粮食作物，同时是一种典型的双子叶植物。其种子为人类提供了丰富的蛋白，高质量的植物油、矿物质和微生素等资源。但是随着环境不断恶化，干旱和土壤盐渍化等非生物逆境严重制约大豆的生产，严重致使大豆产量和品质受到极大影响。因此开展作物抗逆机理研究，改善作物抗性和品质对提高我国的大豆安全具有重要的意义。通过挖掘和克隆非生物逆境相关耐逆基因，同时将目标基因进行遗传转化，对大豆耐逆性选育提供一定的参考价值。利用不同大豆材料筛选出具有愈伤诱导、再生能力较好的品系，为后续基因转化研究积累相关的技术。大豆组培的第一步是种子的消毒，然后获得无菌苗。

目前，大豆组培获得无菌苗的消毒方法主要有四种：氯气消毒、次氯酸钠消毒、升汞消毒法和二次消毒法。由于氯气是剧毒气体，对实验装置的气密性要求很高，研究表明，这个方法对种子消毒效果不彻底，同时对氯气的浓度和消毒时间的控制不统一。次氯酸钠消毒大豆的浓度目前还没有统一的标准，升汞法由于汞的剧毒性以及对环境的污染在国际上已经被淘汰。二次消毒法过程太繁琐，且时间很长。

因此，如何提供一种环境友好且消毒简单、彻底的对大豆种子消毒的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种组培大豆种子的消毒方法，利用一定浓度的过氧化氢代替常规的升汞、次氯酸钠等消毒方法，降低了对环境的污染，节省了消毒的时间，而且，促进了种子的萌发，使无菌苗的获得时间缩短，降低了种子受污染的几率。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种组培大豆种子的消毒方法，包括下述步骤：

1)选取长势一致、表面干净的大豆种子，用无菌水浸泡2-5min，捞出、清洗，备用；

2)将所述步骤1)得到的大豆种子置于75％酒精中浸泡1-2min；

3)将所述步骤2)中得到的大豆种子置于装有13％-17％的H₂O₂溶液的容器中浸泡0.5-2h，期间，将盛有大豆种子和H₂O₂溶液的容器置于摇床上连续振荡；

4)将所述步骤3)中的大豆种子用无菌水清洗3-4次，然后在无菌水中浸泡16-18h，得到消毒的大豆种子。

以上技术方案达到的技术效果是：利用过氧化氢对大豆种子进行消毒，在对种子消毒完毕后，还可以对培养器皿直接消毒；过氧化氢作为废液处理后，相对于常规的种子消毒剂升汞、次氯酸钠等，对环境的污染小。此消毒方法不仅节省时间、消毒彻底，还能够促进大豆种子萌发，缩短了育苗的时间，是一种高效、环保、省时的消毒方法；消毒的大豆种子去除种皮，置于萌发培养基上培养，只需4天，即可获得无菌苗。

作为本发明优选的技术方案，所述步骤1)中清洗的过程为：将用无菌水浸泡的大豆种子在无菌水下冲洗1-3min。

以上技术方案达到的技术效果是：经过无菌水浸泡过的大豆种子表面可能残留有杂质或微生物，经过无菌水冲洗后，可有效去除种子表面的微生物及杂质。

作为本发明优选的技术方案，所述步骤3)中摇床的振荡频率为180-200r/min。