[发明专利]PRRSV SD-YL1712毒株及其感染性克隆的构建方法和应用

说明书

本发明公开了SD‑YL1712毒株及其感染性克隆的构建方法和应用，分离流行毒株并构建的感染性克隆不仅可以在分子层面实现对该毒株的改造，从而为探究PRRSV毒株致病机制，免疫逃避机制，细胞嗜性改变机制等基础研究提供有效辅助；还可以作为一种理想的载体工具，为外源基因的插入提供了良好的平台，并能顺利实现体内的共拯救。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体的说是涉及PRRSV SD-YL1712毒株及其感染性克隆的构建方法和应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种急性传染病，自被发现以来，已经为世界养猪行业带来了巨大的经济损失，是目前对养猪业危害最大的传染病之一。其主要临床症状是能引起怀孕母猪流产、死胎、木乃伊胎，新生仔猪呼吸困难等。PRRSV是单股正链RNA病毒，不分节段，有囊膜，基因组全长约为15kb(不含PolyA尾)，至少可分为15个开放阅读框，分别为编码非结构蛋白的NSP1-12、结构蛋白ORF1a、ORF1b、ORF2-7等。

根据PRRSV的基因组特点，可将其划分为欧洲型毒株(即Ⅰ型PRRSV)和美洲型毒株(即Ⅱ型PRRSV)，二者基因组同源性小于70％。1995年，PRRS在中国首次被发现，朱宝清教授于1996年成功分离出第一株PRRSV毒株Ch1a。2006年，以JX-A1毒株为代表的HP-PRRSV毒株在中国大面积爆发，为中国养猪业带来了巨大的经济损失。此种HP-PRRSV的基因组特征是其Nsp2区有30个氨基酸的不连续缺失。其临床症状为能引起猪高热(温度高于40度)及高死亡率。在此后的十年间，HP-PRRSV在中国持续肆虐，由于PRRSV毒株的高度变异性，对PRRS的防控始终没有取得理想的成果。2008年，名为NADC30的PRRSV毒株在美国开始流行，并在短时间内造成了巨大的经济损失。不幸的是，2013年，基因组特征与NADC30保持高度同源的NADC30-Like毒株开始在中国福建省流行，并迅速蔓延至全国，为养猪业带来了巨大的灾难。NADC30-like毒株具有显著的特征：如其NSP2区有131个AA的不连续缺失，且其致病力呈中等程度；此外，其易与其他毒株发生重组而形成新的毒株，即重组毒株。重组毒株的基因组特点，细胞嗜性和致病性等随亲本毒株的来源，重组位点等的不同而表现出不同的变化。而关于重组毒株发生重组的机制，重组发生的位点等尚不清楚。

自2016年起，由不同谱系PRRSV毒株发生重组而形成的重组毒株开始在中国大范围流行，如由NADC30-like与HP-PRRSV形成的重组毒株；由NADC30与QYYZ形成的重组毒株；由HP-PRRSV-MLV与NADC30-liked形成的重组毒株等。此外，还有由CH1a、HP-PRRSV、NADC30-like三种毒株参与重组的报道。

目前世界范围内针对PRRS并无特别有效的根除办法，各国根据具体国情采取不同的处理措施。而疫苗接种是我国主流的防控手段。国内陆续开发出多种针对PRRSV不同毒株的弱毒疫苗，每种疫苗所对应的免疫程序也早已逐步运用于养殖实践。疫苗的使用使得PRRSV，特别是HP-PRRSV在我国的肆虐得到了有效的控制，为中国养猪业挽回了巨大的经济损失。然而，随着PRRSV毒株的不断进化和变异，特别是NADC30-like毒株和一系列重组毒株的出现，使得现有疫苗的交叉保护难以达到理想的水准，新的疫情不断爆发，并逐渐有增多增强的趋势。此外，由于弱毒疫苗的不科学使用，也逐渐出现了许多由弱毒疫苗反强形成的疫苗毒株，及由其参与形成的重组毒株，为疫苗的有效防控带来了更大的挑战。

因此，警惕PRRSV新毒株的出现，及时了解田间流行毒株的变化情况，准确分析优势毒株的更替，探究其变化规律及起源，比较不同PRRSV毒株间基因组特征及其致病特性等对于研制具有良好交叉保护效果的新型疫苗具有重要指导意义。此外，鉴于传统毒株致弱所得弱毒疫苗免疫后可能由于毒株反强而形成致病性较强的疫苗毒株的风险，开发一种免疫效果更好，中和能力更强，保护谱更广，更加安全的疫苗迫在眉睫。

因此，提供一株SD-YL1712毒株及其感染性克隆的构建方法和应用是本领域技术人员亟需解决的问题。