[发明专利]一种麦考酚酸的发酵工艺

权利要求书

1.一种麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：

S1将接种短密青霉菌的菌株斜面于28℃培养9～10天，加入30％甘油10ml，洗下孢子，摇匀，取7ml置甘油油管中，得甘油孢子；

S2吸取步骤S1制得的甘油孢子放置种子培养基中，在30℃的条件下振荡培养48～72h，得种子菌；

S3将步骤S2得到的种子菌按10％的接种量接入发酵培养基中，在30℃的条件下培养38h，然后降到25℃继续培养160～240h，并及时对发酵液中的葡萄糖和甘氨酸进行补料处理，即得；

所述步骤S3中葡萄糖的补料处理为：在培养过程，根据需要取样检测发酵液中的葡萄糖，并补入体积浓度为80％的无菌葡萄糖溶液使发酵液中葡萄糖浓度维持在28～32g/L；

所述步骤S3中甘氨酸的补料处理为：培养至70～73h开始，补入200g/L-230g/L无菌甘氨酸溶液，具体补入程序为：培养至70～73h时，补入比例为1.6g/L；培养至90h时，补入比例为3g/L；培养至102～106h时，补入比例为5g/L；培养至122～126h时，补入比例为5g/L；培养至140～144h时，补入比例为3g/L；培养至156h时，补入比例为1.6g/L；

所述补料处理时：培养至150h时，检查最近一次生化参数测定中的pH结果，如果pH高于6.0或液面过高，则156h继续补入甘氨酸溶液，否则不再补甘氨酸溶液；

所述补料处理时：放罐前24小时不补入甘氨酸溶液。

2.如权利要求1所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S2中的种子培养基由以下成分组成：

葡萄糖85～95g/L、酵母粉10～30g/L、蛋白胨15～20g/L、K₂HPO₄·3H₂O 1～4g/L、MgSO₄·7H₂O 0.2～0.6g/L、GPE消沫剂1.4～2.0g/L，调节pH至4.0～5.0。

3.如权利要求2所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S2中的种子培养基由以下成分组成：

葡萄糖90g/L、酵母粉20g/L、蛋白胨17g/L、K₂HPO₄·3H₂O 2g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、GPE消沫剂1.8g/L，调节pH至4.0～5.0。

4.如权利要求1所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S3中的发酵培养基由以下成分组成：

葡萄糖200～300g/L、甘氨酸4～6g/L、蛋氨酸1～3g/L、蛋白胨4～6g/L、啤酒酵母4～6g/L、葵花籽饼粉10～20g/L、K₂HPO₄·3H₂O 1～3g/L、MgSO₄·7H₂O 0.2～0.6g/L、ZnSO₄·7H₂O 2～4g/L、CuSO₄·7H₂O 0.2～0.6g/L、GPE消沫剂0.4～0.6g/L，调节pH至4.0～5.0。

5.如权利要求4所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S3中的发酵培养基由以下成分组成：

葡萄糖250g/L、甘氨酸5g/L、蛋氨酸1g/L、蛋白胨5g/L、啤酒酵母5g/L、葵花籽饼粉15g/L、K₂HPO₄·3H₂O 2g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、ZnSO₄·7H₂O 3g/L、CuSO₄·7H₂O0.5g/L、GPE消沫剂0.5g/L，调节pH至4.0～5.0。

6.如权利要求1所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述补料处理时：所述补入量的计算公式为：

V(L)＝W(L)×d(g/L)÷C(g/L)

其中：V为甘氨酸溶液的补入数量(L)，W为发酵液体积(L)；d为补入比例(g/L)；C为甘氨酸溶液浓度。