[发明专利]Na+-H+交换泵抑制剂联合顺铂促卵巢癌耐药细胞凋亡的方法

说明书

本发明公开了Na⁺‑H⁺交换泵抑制剂联合顺铂促卵巢癌耐药细胞凋亡的方法，包括如下步骤：准备药物与试剂；细胞培养及实验分组；MTT法检测乙基异丙基氨氯吡咪（EIPA）和顺铂(DDP)对细胞A2780/Taxol的IC₅₀；Hoechst 33258染色检测细胞调亡；Quantative Real‑time PCR法检测A2780/Taxol细胞中目的基因的含量；Western blot法检测PI3K、Akt蛋白及MRP‑1的表达量；细胞内Rh123的积累；统计学分析。本发明在卵巢癌耐药细胞A2780/Taxol中，EIPA诱导的细胞酸化抑制了PIK3/Akt信号通路的作用，进而降低MRP‑1的表达及其向外转运药物的作用，能够增加抗肿瘤药物在卵巢癌细胞内的积累，提高化疗药物的疗效。

技术领域

本发明涉及生物医疗技术领域，特别涉及Na⁺-H⁺交换泵抑制剂联合顺铂促卵巢癌耐药细胞凋亡的方法。

背景技术

卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,死亡率居女性生殖系统恶性肿瘤的首位，严重威胁女性身体健康和生命。卵巢癌发病隐匿，缺乏早起诊断标志，多数患者被确诊时已经属于晚期。目前，临床对于卵巢癌的首选治疗方法是肿瘤减灭术与以铂类药物为主的联合治疗方法。但是化疗使肿瘤细胞产生的耐药性，导致患者5年生存率徘徊在40%，严重影响了治疗效果。卵巢癌的化疗耐药常表现为多药耐药(multidnug resistance, MDR),其耐药机制主要有:药代动力学、药物作用靶点、DNA损伤修复系统、细胞调亡调控、肿瘤微环境、细胞外信号转导通路、微小RNA、肿瘤干细胞及上皮间质转化等。无论何种机理存在，细胞内pH值增高是耐药细胞株所具有的共同改变，这就为肿瘤耐药的逆转研究提供了一个新的方向。目前，化疗仍然是临床中对肿瘤的治疗的主要对策之一，但化疗产生的肿瘤多耐药性却是降低疗效的一个重大的难题。

发明内容

本发明的目的在于提供Na⁺-H⁺交换泵抑制剂联合顺铂促卵巢癌耐药细胞凋亡的方法，本发明在卵巢癌耐药细胞A2780/Taxol中，EIPA 诱导的细胞酸化抑制了PIK3/ Akt信号通路的作用，进而降低MRP-1的表达及其向外转运药物的作用，能够增加抗肿瘤药物在卵巢癌细胞内的积累，提高化疗药物的疗效，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

Na⁺-H⁺交换泵抑制剂联合顺铂促卵巢癌耐药细胞凋亡的方法，包括如下步骤：

S1：准备药物与试剂

材料为：乙基异丙基氨氯吡咪、顺铂、紫杉醇、卵巢癌耐紫杉醇细胞A2780/Taxol、反转录酶试剂盒、荧光染料SYBR Green real-timePCR反应液、Rh123、Trizol 、Q-PCR引物、兔抗人β-actin、MDR-1抗体、兔抗人PI3K、Akt-1抗体、优质胎牛血清、 Annexin-V細胞凋亡试剂盒、RMP11640培养基；

S2：细胞培养及实验分组

卵巢癌耐紫杉醇细胞A2780/Taxol培养于含800ng/mlTaxol、10%胎牛血清的RPMI1640培养基中，置于37C、5%CO2培养箱中孵育，实验分4组：空白对照组、顺铂组、乙基异丙基氨氯吡咪组、乙基异丙基氨氯吡咪联合顺铂组；

S3：MTT法检测乙基异丙基氨氯吡咪和顺铂对细胞A2780/Taxol的IC₅₀