[发明专利]无创获取胎儿稀有细胞的试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种无创获取胎儿稀有细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）提供细胞，所述细胞是通过棉签拭子或巴氏涂片从孕妇产道中获得，所述孕妇的孕周为5~25周；

2）采用内质网荧光探针以及与所述内质网荧光探针不同颜色的细胞荧光染料对靶滋养层细胞进行染色及鉴定，所述细胞荧光染料选自DAPI、Hoechst33342中的至少一种；

3）在高倍镜视野下观察、确认、拍照，使用Image J 软件对每一个细胞进行细胞圈取，自动荧光强度定量，并计算靶细胞与背景细胞之间的荧光强度差异；根据靶细胞与背景细胞之间的荧光强度差异，筛选得到胎儿滋养层细胞；靶细胞荧光强度/背景细胞平均荧光强度≥3时，认为靶细胞荧光为强阳性，靶细胞用于下一步的单细胞挑取；

4）通过细胞分选平台挑取得到目标细胞，采用装有细胞裂解液的试剂管回收挑取的单细胞；

5）稀有胎儿滋养层细胞的全基因组扩增与鉴定：

51）单细胞两次退火环状循环扩增；

52）短串联重复序列分析和单核苷酸多态性分析，得到来源于胎儿的滋养层细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2）中，所述内质网荧光探针选自ER-Tracker Red、ER-Tracker Green中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤4）中，采用CellCelectorTM 全自动细胞筛选系统挑取细胞。

4.一种无创获取胎儿稀有细胞的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒采用权利要求1~3任一项所述的方法无创获取胎儿稀有细胞，所述试剂盒包括内质网荧光探针、与所述内质网荧光探针不同颜色的细胞荧光染料、细胞裂解液、预扩增混合液、扩增混合液、短串联重复序列分析体系、上样混合物、单核苷酸多态性分析体系，所述细胞裂解液为Cell LysisBuffer、Cell Lysis Enzyme，所述预扩增混合液为Pre-Amp Buffer、Pre-Amp Enzyme Mix，所述扩增混合液为Amplification Buffer、Amp Enzyme Mix，所述短串联重复序列分析体系为PowerPlex® 21 5× Master Mix、PowerPlex® 21 5× Primer Pair Mix，所述上样混合物为WEN ILS 500、Hi-Di™ formamide，所述单核苷酸多态性分析体系为TaKaRa TaqHS、10×PCR Buffer、dNTP Mixture、引物。

5.根据权利要求4所述试剂盒在制备或筛选单基因疾病诊断试剂中的应用，其特征在于：所述单基因疾病为地中海贫血。

6.用于检测地中海贫血的试剂盒，其特征在于：包括权利要求4所述试剂盒。