[发明专利]一种猫细小病毒VP2蛋白及制备的病毒样颗粒

说明书

本发明提供本一种猫细小病毒VP2蛋白及制备的病毒样颗粒，其中VP2蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:2；其编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明再一个方面提供一种重组杆状病毒，其中包含有编码上述VP2蛋白的核苷酸片段；本发明所构建的重组杆状病毒用于在昆虫细胞中制备猫细小病毒的病毒样颗粒。本发明还提供一种猫细小病毒亚单位疫苗，包括有抗原和疫苗佐剂，其所用的抗原为本发明制备的病毒样颗粒。本发明制备的疫苗免疫猫后能提高猫的抗体滴度，能够有效预防猫细小病毒的感染。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，更具体地涉及一种猫细小病毒VP2蛋白，以及用昆虫细胞表达体系表达猫细小病毒的病毒样颗粒(VLP)；还涉及所获得的重组病毒样颗粒，及其在猫细小病毒疫苗研制中的应用。

背景技术

猫泛白细小减少症是由猫细小病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)引起的一种高度接触性急性传染病，具有很高的发病率和死亡率。患病动物表现为高热、呕吐、腹泻、白细胞数目严重减少和肠炎等症状。该病毒在自然条件下感染猫科和鼬科多种动物，如虎、豹、狮子和浣熊，但以体型较小的猫科动物，包括水貂最为易感。该病每年对动物养殖业带来重大经济损失。

猫细小病毒属细小病毒科细小病毒属，为单股负链线性DNA病毒，无囊膜，对物理化学因素具有很强的抵抗力。FPV病毒基因组编码2种结构蛋白(VP1、VP2)和2种非结构蛋白(NS1、NS2)，其中VP2结构蛋白是病毒刺激机体产生保护性抗体的重要抗原蛋白。

杆状病毒是一类大型的杆状囊膜病毒，基因组为环状双链DNA，大小约为80-180kbp。杆状病毒作为病原微生物寄生于节肢动物，具有高度的宿主特异性，其宿主主要有鳞翅目双翅目和膜翅目昆虫，尚未发现节肢动物以外的杆状病毒宿主。在杆状病毒的众多成员中，目前研究和利用最多的是苜蓿银纹夜蛾多粒包埋核型多角体病毒(AcMNPV)。AcMNPV病毒基因组为共价闭合环状超螺旋的双链DNA，约130kb,其基因组序列目前已测出。近年来，杆状病毒表达载体以自身的优势，已经在表达载体上占了主导的地位。杆状病毒表达系统与其他的表达系统相比，杆状病毒表达系统具有操作简单、安全性高，可容纳大的目的基因，表达外源蛋白效力高，有翻译后修饰的作用，表达蛋白的免疫原性、生物活性与天然的蛋白相似等优点(Anderson et al.,1995；Wang et al.,2001；Ribeiro et al.,2001)。

目前市场上还没有应对FPV的特效药和有效的治疗办法，临床上以免疫预防为主，但是国内还没有真正批准上市的FPV疫苗。所以需要研制一种安全、有效的亚单位疫苗来填补市场的空白。

发明内容

本发明提供一种猫细小病毒VP2蛋白及制备的病毒样颗粒，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种猫细小病毒中筛选获得的新型的VP2蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2；

本发明还对上述的VP2蛋白进行优化，优化后的蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:4；

编码上述VP2蛋白的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO:3；

本发明还提供一种重组杆状病毒，其中包含有编码VP2蛋白的核苷酸片段；

本发明所构建的重组杆状病毒用于在昆虫细胞中制备猫细小病毒的病毒样颗粒；

本发明再一个方面提供一种猫细小病毒的病毒样颗粒，是使用上述的重组杆状病毒感染昆虫细胞后，培养收集获得的。

所述的昆虫细胞为昆虫细胞Sf9；

本发明所制备的病毒样颗粒用于制备疫苗；

本发明还提供一种猫细小病毒亚单位疫苗，包括有抗原和疫苗佐剂，其所用的抗原为本发明制备的病毒样颗粒；