[发明专利]用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法

说明书

本发明涉及高效液相色谱流动相分析技术领域，本发明提供的用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法，包括以下步骤：初步选取实验条件，选取合适的洗脱剂和试验温度；获取各组份的保留值方程和计算色谱峰宽；预测组份保留时间，利用保留值方程，对各组份在任意流动相比例下的移动速度进行积分，得到线性多阶梯度条件下，样品各组份在色谱柱中移动的总距离公式，结合色谱柱长计算各组份保留时间；优化流动相比例梯度，给定分离度最小值、分离度最大值、最大实验时间要求，计算分离度小于最小值的不进行优化。本发明的优点在于使色谱图上各物质色谱峰充分分离，同时又不过度分离。

技术领域

本发明涉及高效液相色谱流动相分析技术领域，特别涉及一种用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法。

背景技术

在色谱分图法中，传动的方法分两种：1、通过查阅文献或标样实测的方法，获取各组份保留时间与流动相比例的关系，实验人员根据经验选择一组条件进行实验，根据实验所得的色谱图检验条件的正确性，或修改条件重复进行实验；

2、根据塔板理论，采用计算机数值计算的方式，预测某一实验条件下的色谱图，色谱图的分析及对实验条件的修正，仍然需要依赖实验人员的经验。

发明内容

本发明提供的用于高效液相色谱流动相比例梯度优化方法，目的在于使色谱图上各物质色谱峰充分分离，同时又不过度分离。

为了实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明的技术方案包括以下步骤：

S1.初步选取实验条件：选取样品中各组份的标样，分别以不同洗脱剂为流动相，并在不同温度条件下，测定和计算各物质色谱峰的分离度，选取最小分离度最大的洗脱剂和试验温度作为后续实验；

S2.获取各组份的保留值方程和计算色谱峰宽公式：在选取的试验温度和洗脱剂前提下，为样品中各组份建立描述流动相比例和容量因子关系的保留值方程和色谱峰宽计算公式；

S3.预测组份保留时间，利用保留值方程，对各组份在任意流动相比例下的移动速度进行积分，得到线性多阶梯度条件下，样品各组份在色谱柱中移动的总距离公式，结合色谱柱长计算各组份保留时间；

S4.优化流动相比例梯度：给定分离度最小值、分离度最大值、最大实验时间要求，根据步骤S3，在设定的流动相比例条件下，计算各组份的保留时间，选择最佳的比例，使得样品中所有组份色谱峰基线分离度满足要求。

进一步地，所述步骤S2中，保留值方程是：ln K＝a+b ln f+cf，其中，a、b、c为待测色谱特性常数；K为容量因子；f为二元流动相中洗脱剂的体积分数，即流动相比例；

各组份的容量因子K通过公式t_R＝t₀(1+K)计算而得，其中，t_R为保留时间、t₀为色谱柱死时间；测得色谱柱死时间，并测得该组份在不同流动相比例下的保留时间，计算对应的K值，并与流动相比例拟合出保留值方程的常数；

色谱峰宽与保留时间、死时间之关系为：其中，n_eff为有效理论塔板数，W为色谱峰宽；

对于每种组份，步骤如下：

a)选取多个不同的流动相比例点，分别测得不同比例下该组份的保留时间t_R和峰宽W；

b)根据t_R＝t₀(1+K)计算每个体积分数下对应的容量因子K；

c)对流动相比例f与对应的容量因子K进行线性拟合，计算保留值方程中的a、c；

d)对峰宽W和保留时间t_R进行多项式拟合，确定W和t_R关系的多项式系数；