[发明专利]切除炭疽芽胞杆菌中pXO1和pXO2质粒的方法

权利要求书

1.切除炭疽芽胞杆菌中pXO1和pXO2质粒的方法，其特征在于：所述方法采用CRISPR/Cas9系统切除出发炭疽芽胞杆菌中pXO1和pXO2质粒，所述CRISPR/Cas9系统中包含名称分别为sgRNA1和sgRNA2的两个sgRNA，所述sgRNA1识别的靶序列为pXO1质粒含有而炭疽芽胞杆菌不含有的特异序列；所述sgRNA2识别的靶序列为pXO2质粒含有而炭疽芽胞杆菌不含有的特异序列；

将所述sgRNA1识别的靶序列记为靶序列1，所述靶序列1为序列表中序列3的第1-20位所示的DNA片段；

将所述sgRNA2识别的靶序列记为靶序列2，所述靶序列2为序列表中序列4的第1-20位所示的DNA片段。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述sgRNA1的序列为将序列表中序列3中的T替换为U得到的RNA序列；

所述sgRNA2的序列为将序列表中序列4中的T替换为U得到的RNA序列。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法包括向所述出发炭疽芽胞杆菌中导入含有所述sgRNA1和所述sgRNA2的编码基因的表达盒，使所述

sgRNA1和所述sgRNA2得到表达，得到切除pXO1和pXO2质粒的炭疽芽胞杆菌。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9系统还包括Cas9蛋白质。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将含有Cas9蛋白质的编码基因的表达盒导入所述出发炭疽芽胞杆菌中，使Cas9蛋白质得到表达。

6.成套sgRNA，由权利要求1或2中所述sgRNA1和所述sgRNA2组成。

7.成套生物材料，由名称分别为生物材料1和生物材料2的两种生物材料组成；

所述生物材料1为下述C1）至C4）中的任一种：

C1）编码权利要求1或2中所述sgRNA1的核酸分子；

C2）含有C1）所述核酸分子的表达盒；

C3）含有C1）所述核酸分子的重组载体、或含有C2）所述表达盒的重组载体；

C4）含有C1）所述核酸分子的重组微生物、或含有C2）所述表达盒的重组微生物、或含有C3）所述重组载体的重组微生物；

所述生物材料2为下述D1）至D4）中的任一种：

D1）编码权利要求1或2中所述sgRNA2的核酸分子；

D2）含有D1）所述核酸分子的表达盒；

D3）含有D1）所述核酸分子的重组载体、或含有D2）所述表达盒的重组载体；

D4）含有D1）所述核酸分子的重组微生物、或含有D2）所述表达盒的重组微生物、或含有D3）所述重组载体的重组微生物。

8.成套产品，为下述X1）或X2）：

X1）成套产品，由权利要求6所述成套sgRNA与Cas9蛋白质组成；

X2）成套产品，由权利要求7所述成套生物材料和与Cas9蛋白质相关的生物材料组成；所述与Cas9蛋白质相关的生物材料为下述E1）至E4）中的任一种：

E1）编码Cas9蛋白质的核酸分子；

E2）含有E1）所述核酸分子的表达盒；

E3）含有E1）所述核酸分子的重组载体、或含有E2）所述表达盒的重组载体；

E4）含有E1）所述核酸分子的重组微生物、或含有E2）所述表达盒的重组微生物、或含有E3）所述重组载体的重组微生物。

9.权利要求1-5中任一所述方法，或权利要求6所述成套sgRNA，或权利要求7所述成套生物材料，或权利要求8所述成套产品的下述任一应用：

Y1）在制备切除炭疽芽胞杆菌中pXO1和/或pXO2质粒产品中的应用；

Y2）在制备预防和/或治疗炭疽芽胞杆菌所致疾病疫苗和/或药物中的应用。