[发明专利]提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法

权利要求书

1.高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1.原料预处理

选取桦褐孔菌，清水冲洗表面杂质后，干燥至含水量为2％～5％，机械剪切粉碎；

步骤2.原料浸泡

将预处理的桦褐孔菌原料中加入提取溶剂，于70℃下浸泡至材料充分吸胀；其中，所述加入的提取溶剂的量为：干燥桦褐孔菌原料与提取溶剂的质量比为1:3.73，提取溶剂为60％的乙醇水溶液，并用1mol/L盐酸将其酸碱度pH调为3，浸泡时间为90分钟；

步骤3.装柱

将充分吸胀的桦褐孔菌原料与提取溶剂一起转入层析柱中，室温下，用柱层析洗脱的方法将多酚从层析柱内的桦褐孔菌中洗脱出来；

步骤4.循环柱层析提取

将层析柱内流出的洗脱液以1个柱体积为单位进行收集，第1根柱的提取液经大孔树脂柱吸附后流出的平液直接用于第2根提取柱的提取，依次类推，实现多个层析柱循环提取；

步骤5.大孔树脂的预处理

先将大孔树脂依次用95％酒精、0.1mol/L盐酸、0.1mol/L NaOH溶液分别浸泡12小时后，再装入层析柱，并使层析柱中树脂的高度为柱直径的10～15倍，用蒸馏水洗涤；

步骤6.大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取

将步骤4的提取液加入经步骤5预处理的大孔树脂柱，或将步骤4的提取液加入再生后的大孔树脂柱，加样时柱内的流出液以柱体积为单位分开收集，多酚被吸附后，大孔树脂柱流出液直接用于下一根提取柱中桦褐孔菌多酚的提取；

步骤7.大孔树脂柱蒸馏水洗除杂

待样品完全流入柱内后，用蒸馏水洗涤大孔树脂柱，洗去杂质，不损失多酚；

步骤8.洗脱

用80％的乙醇从大孔树脂柱中洗脱多酚，收集洗脱液；

步骤9.静置除杂

将步骤8收集好的多酚洗脱液密封，避光在低温冷藏箱中放置12小时后减压过滤或离心过滤除去沉淀；

步骤10.减压浓缩

将步骤9除杂得到的多酚滤液或离心上清液于40～45℃下减压浓缩至除去乙醇；

步骤11.干燥

将步骤10减压浓缩后的多酚浓缩液于-20℃预冷2小时后，再经-80℃真空冷冻干燥12小时得黄色粉末，即为桦褐孔菌多酚。

2.根据权利要求1所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法，其特征在于：所述步骤1原料预处理中，选取桦褐孔菌，清水冲洗表面杂质后，干燥至含水量为2％～5％，机械剪切粉碎；其中，所述桦褐孔菌为成熟干燥的桦褐孔菌，干燥温度为45℃，机械剪切粉碎至40目。

3.根据权利要求2所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法，其特征在于：所述步骤3装柱中，将充分吸胀的桦褐孔菌原料与提取溶剂一起转入层析柱或容器中，室温下，用柱层析洗脱的方法将多酚从层析柱内的桦褐孔菌中洗脱出来；其中，所述层析柱中材料的高度应为柱直径的5倍，洗脱流速为1BV/小时，柱内液面始终高于材料。

4.根据权利要求 3所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法，其特征在于：所述步骤5大孔树脂的预处理中，所述用蒸馏水洗涤具体为用蒸馏水以1.5BV/小时的流速洗涤5BV。

5.根据权利要求 4所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法，其特征在于：所述步骤6大孔树脂柱层析吸附及平液用于下一根提取柱提取中，将步骤4的提取液加入经步骤5预处理的大孔树脂柱，或将步骤4的提取液加入再生后的大孔树脂柱，加样时柱内的流出液以柱体积为单位分开收集，多酚被吸附后，大孔树脂柱流出液直接用于下一根提取柱中桦褐孔菌多酚的提取；其中，提取液加入的流速为1.5BV/小时，加样体积不超过大孔树脂柱体积的4.5倍。

6.根据权利要求 5所述的高效提取及纯化桦褐孔菌多酚的方法，其特征在于：所述步骤7大孔树脂柱蒸馏水洗除杂中，待样品完全流入柱内后，用蒸馏水洗涤大孔树脂柱，具体为用蒸馏水以2BV/小时流速洗涤树脂柱3BV，洗去杂质，不损失多酚。