[发明专利]检测西马特罗的酶联免疫试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测西马特罗的酶联免疫试剂盒，其特征在于包括：包被有包被原的酶标板、西马特罗标准品溶液、西马特罗抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原为西马特罗偶联抗原，所述酶结合物为酶标记的西马特罗抗体，所述西马特罗抗体是以西马特罗偶联抗原作为免疫原免疫动物得到的；所述西马特罗偶联抗原是由西马特罗半抗原与载体蛋白偶联得到，所述西马特罗半抗原的制备方法如下：

a：取苄腈-4乙酰基-2-氨1.0g，加60ml三氯甲烷溶解，加溴化铜1.41g，加热回流反应4h,停止反应，加水50ml，震荡，静置分层，分去水相，有机相蒸干，正己烷与二氯甲烷的体积比为3：1，70ml，重结晶，得到2-氨基-4-(2'-溴乙酰基)苯甲腈1.3g，收率87.25%；

b：取2-氨基-4-(2'-溴乙酰基)苯甲腈1.3g，加乙腈80ml溶解，加KOH0.46g，碘化钠0.21g，搅拌，加4-氨基-4-甲基戊酸0.86g，加热，回流反应12h，停止反应，旋蒸，除去乙腈，加水80ml，加1mol/L盐酸调节PH值到6，乙酸乙酯100ml×3，萃取三次，合并有机相，浓缩蒸干，二氯甲烷/环己烷的体积比为1：3，90ml重结晶，得到丙酸西马特罗酮基中间产物1.2g，收率76.4%；

c：取丙酸西马特罗酮基中间产物1.2g，加甲醇60ml溶解，冷却到0-5℃，在搅拌下，加硼氢化钠0.31g，搅拌2h，停止反应，恢复到室温，旋蒸，除去甲醇，加水100ml，加1mol/L盐酸调节PH值到6，加100ml乙酸乙酯萃取，有机相水洗，蒸干，上硅胶柱，二氯甲烷/甲醇的体积比为10：1，洗脱分离，得到丙酸西马特罗半抗原产物0.91g，收率75.8%；

所述西马特罗半抗原的分子结构式为：

。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述西马特罗抗体为西马特罗单克隆抗体或西马特罗多克隆抗体。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述免疫原的制备方法如下：

取丙酸西马特罗半抗原产物5.8mg，加DMF1ml溶解，加EDC11mg，加NHS7mg，室温反应2h，得到半抗原活化液A液；取血蓝蛋白KLH 20mg，加3ml PB缓冲液溶解，得到B液，将A液滴加到B液中，4℃反应8h，0.02M PB缓冲液透析纯化三天，每天换液三次，得到西马特罗-KLH偶联物免疫原，分装，-20℃保存备用。

4.一种检测样品中西马特罗含量的方法，包括步骤：

（1）样品前处理；

（2）用权利要求1~3任一项所述的试剂盒进行检测；

（3）分析检测结果。