[发明专利]一种基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱及其制备方法

说明书

本发明公开了一种基于固定化SNAP‑tag融合蛋白的细胞膜色谱柱及其制备方法，属于细胞膜色谱柱制备技术领域。该方法首先将苯甲基鸟嘌呤键合到硅胶上，然后利用SNAP‑tag与其底物苯甲基鸟嘌呤的高特异性识别和稳定共价结合使细胞膜固定苯甲基鸟嘌呤修饰的硅胶固定相表面，即得细胞膜色谱固定相，最后将混合固定相湿法装柱，构成基于固定化SNAP‑tag融合蛋白的细胞膜色谱柱。本发明制备的基于固定化SNAP‑tag融合蛋白的细胞膜色谱柱延长细胞膜色谱柱的柱寿命，提高其稳定性。解决了现有的细胞膜色谱柱存在特异性较差的问题，为细胞膜色谱柱的商品化奠定了基础。

技术领域

本发明属于细胞膜色谱柱制备技术领域，涉及一种基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱及其制备方法。

背景技术

细胞膜色谱是一种有效的从复杂体系中直接筛选识别目标组分的新技术。但其作为一种新兴技术，不可避免的仍存在一定的缺陷，主要体现在两个方面：第一是细胞膜色谱柱的寿命有待进一步提升，作为生物亲和色谱方法的一种，细胞膜具有所有生物亲和色谱的通性特点，即生物材料维持活性较难，而且由于细胞膜与硅胶之间主要通过疏水作用相结合，因而其柱效降低较快，寿命往往较短，因为随着细胞膜色谱柱的使用，其上生物材料也就是细胞膜会逐渐脱落失活，导致其有效使用寿命往往不到72小时，这就大大阻碍了细胞膜色谱柱的商品化应用道路。第二是细胞膜色谱特异性较差，细胞膜色谱作为一种生物亲和色谱，其活性筛选功能是经由其上所搭载的生物活性材料，亦即细胞膜所实现的。而由于细胞膜表面受体众多，难以确定其上哪个蛋白靶点与潜在活性药物之间相互作用，这也对后期进行潜在活性成分的药理活性验证带来了不便。

在众多生物分析和生物医学的研究领域中，蛋白质固定化发挥着越来越重要的作用，传统的蛋白质固定化方法(如非特异性物理吸附、亲和标签的非共价结合、选择性的酶共价结合等)往往存在特异性不好、结合力不稳定、靶蛋白功能可能受化学修饰的影响等问题。SNAP-tag凭借其与其底物苯甲基鸟嘌呤(benzylguanine,BG)的高特异性识别和稳定共价结合的性质，成为目前蛋白固定化最有力的工具。SNAP-tag是一种新型的自我标记标签蛋白，SNAP-tag无论在体内还是体外都可以特异性并快速与其配体，即苯甲基鸟嘌呤(benzylguanine,BG)衍生物发生反应，以共价键结合。苯甲基鸟嘌呤可事先固定在基质表面，然后混合提取液中的SNAP-tag融合蛋白即可特异性地与底物作用，形成共价键，从而使得融合蛋白间接固定在基质表面。

但是，目前关于基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱及其制备方法等技术还鲜有报道。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱及其制备方法，该细胞膜色谱柱的柱寿命延长，稳定性提高，特异性强；该制备方法操作简单，易于实现。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了一种基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱，该细胞膜色谱柱是将苯甲基鸟嘌呤键合到硅胶上，细胞膜上的SNAP-tag融合受体特异性结合苯甲基鸟嘌呤，使SNAP-tag融合蛋白固定在硅胶表面得到细胞膜固定相，再将细胞膜固定相采用湿法装柱制得。

优选地，所述硅胶为氨基化硅胶。

进一步优选地，苯甲基鸟嘌呤通过三聚氯氰键合到氨基化硅胶上。

进一步优选地，所述氨基化硅胶为氨丙基硅胶。

本发明还公开了一种基于固定化SNAP-tag融合蛋白的细胞膜色谱柱的制备方法，包括以下步骤：

1)将3-氨丙基三乙氧基硅烷键合到硅胶上，制得氨丙基硅胶；

2)采用三聚氯氰修饰氨丙基硅胶，制得三聚氯氰修饰的硅胶固定相；