[发明专利]一种人类唾液中C型反应性蛋白彩色成像的方法及装置

权利要求书

1.一种人类唾液中C型反应性蛋白彩色成像的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1、制备PORT芯片，用于产生等离光子谐振耦合效应的设备；

步骤2、将PORT芯片覆盖CRP抗体，用来特异性检测CRP蛋白的量；

步骤3、配制CRP浓度标准样品，用于测量样品中的CRP浓度；

步骤4、采用等离-光子谐振技术及光敏传感的方法检测CRP标准样品浓度；将PORT芯片固定在光学显微镜中，然后将100μl在CRP浓度标准样品溶液滴到PORT芯片，通过光学显微镜观察；以全波段LED光源、离光子谐振耦合芯片传感器件以及和光学显微镜链接的数码相机组成的图像采集系统；

步骤5、采集到的图像通过PC端ImageJ软件分析红色通道的透光率变化来定量分析待测唾液中的CRP浓度。

2.根据权利要求1所述的一种人类唾液中C型反应性蛋白彩色成像的方法，其特征在于，制备PORT芯片采用复制成形工艺。

3.根据权利要求2所述的一种人类唾液中C型反应性蛋白彩色成像的方法，其特征在于，制备PORT芯片方法如下，利用激光干涉光刻在石英基板上制作锥形纳米柱图案，然后将紫外光固化聚合物NOA-61均匀散布在模具上，顶部以聚对苯二甲酸乙二醇酯支撑；用紫外光进行2分钟固化处理，然后将聚对苯二甲酸乙二醇酯基板连同周期性纳米孔道图案从模具上仔细剥除；通过电子束蒸发沉积形成一个钛粘附层和一个黄金层，以实现等离激元器件成形，然后利用射频等离子体溅射沉积二氧化钛谐振腔层，而后通过15nm钛粘附层和顶部黄金层的电子束蒸发形成纳米谐振腔。

4.根据权利要求3所述的一种人类唾液中C型反应性蛋白彩色成像的方法，其特征在于，所述钛黏附层、黄金层和二氧化钛谐振腔层的厚度分别是15nm、210nm和170nm。

5.根据权利要求1所述的一种人类唾液中C型反应性蛋白彩色成像的方法，其特征在于，PORT芯片覆盖CRP抗体的方法如下，在室温条件下将PORT芯片置于1mM11-巯基十一烷酸溶液中24小时，用70％乙醇清洗后以氮气吹干；加入400×10-3M1-乙烷基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亚胺和100×10-3MN-羟基丁二酰亚胺的1:1混合液中培养30分钟；磷酸缓冲盐溶液清洗一次后立即放入30μg/ml单克隆抗CRP抗体内室温培养2小时，PBS清洗一次后用氮气吹干；加入30μg/ml牛血清白蛋白阻断液中室温培养30分钟，去除牛血清白蛋白阻断液并加入10％乙醇胺溶液室温培养30分钟，以覆盖未反应的NHS酯；超纯水清洗后一次后，氮气吹干后放置于干燥环境中；需要使用时将芯片粘于光学显微镜观察部位。

6.根据权利要求1所述的一种人类唾液中C型反应性蛋白彩色成像的方法，其特征在于，配制CRP浓度标准样品的方法如下，采用250ng/ml的CRP蛋白溶液稀释配制为不同浓度梯度的CRP标准样品溶液；稀释底液为人工唾液缓冲液。

7.根据权利要求1所述的一种人类唾液中C型反应性蛋白彩色成像的方法，其特征在于，红色通道的波长区域为580-625nm。