[发明专利]长链非编码RNA NONHSAT005760.2作为骨质疏松诊断标志物的应用

权利要求书

1.长链非编码RNA NONHSAT005760.2作为骨质疏松诊断标志物的应用，其特征在于，包括以下步骤：

检测骨密度正常人和骨质疏松患者外周血单核细胞的(PBMC)的LncRNA；

计算细胞系的基因表达量，确定骨密度正常人和骨质疏松患者之间的差异LncRNA，并检测差异LncRNA NONHSAT005760.2在骨组织中的表达量，证实LncRNA NONHSAT005760.2在骨质疏松患者骨质组织中高表达；

人骨髓间充质干细胞诱导成骨分化，观察所述差异LncRNA在成骨过程中的变化，证实差异LncRNA NONHSAT005760.2与骨形成有关，证实LncRNA NONHSAT005760.2作为骨质疏松诊断标志物。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：检测骨密度正常人和骨质疏松患者外周血单核细胞的(PBMC)的LncRNA，包括收集样品、高通量测，包括以下步骤：

S21、收集60位骨质疏松患者和90位骨密度正常女性的血液样本，其中骨质疏松患者和骨密度正常人均为45-70岁区间绝经妇女；

S22、对上述血液进行分离，分成上层的血浆和下层的血细胞，下层的血细胞中分离出外周血单核细胞(PBMC)，总RNA去除核糖体RNA，以最大限度保留所有非编码RNA；

S23、非编码RNA通过转录、酶降解、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增，并建库；

S24、建好的150bp PE文库在BGISEQ500上进行高通量测序。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：计算细胞系的基因表达量，确定骨密度正常人和骨质疏松患者之间的差异LncRNA，并检测差异LncRNA NONHSAT005760.2在骨组织中的表达量，证实LncRNA NONHSAT005760.2在骨质疏松患者骨质组织中高表达，包括以下步骤：

S41、下机的原始reads预处理，将下机数据通过SOAP与核糖体数据库比对，去除序列中核糖体RNA数据，然后再去除接头污染、低质量reads、含N碱基reads，得到clean data，每个样本产生不少于50M clean data；

S42、样本定量和计算差异表达，将每个样本的clean data通过bowtie2比对到mRNA和LncRNA序列上，通过rsem计算每个编码基因和LncRNA的TPM值，通过DEGseq分别计算骨质疏松组和骨量正常组的组间差异；

S43、差异LncRNA的靶基因预测，所述差异LncRNA靶基因预测使用RNAplex，来预测反义LncRNA与mRNA之间的互补结合。