[发明专利]UMI-77作为线粒体自噬诱导剂在制备治疗炎症及神经退行性疾病药物中的应用

说明书

本发明公开了一种UMI‑77作为线粒体自噬诱导剂在制备治疗炎症及神经退行性疾病药物中的应用。本发明提出了MCL1抑制剂UMI‑77对线粒体自噬的诱导作用，通过对急性肝炎，炎症性肠病和APP/PS1小鼠模型中的效果来看，UMI‑77对炎症有显著的抑制效果，对阿尔兹海默症有显著缓解效果。

技术领域

本发明属于炎症治疗技术领域，具体地说，涉及一种UMI-77作为线粒体自噬诱导剂在制备治疗炎症及神经退行性疾病药物中的应用。

背景技术

线粒体自噬在炎症的抑制过程中发挥重要作用，而炎症是机体对抗感染的基本策略，同时也是导致疾病加重的主要原因，如某些神经退行性疾病，阿尔兹海默症。因此，筛选新的安全有效的线粒体自噬诱导剂是可能的抑制炎症，缓解疾病的治疗策略。现有的线粒体自噬诱导剂主要原理为破坏线粒体的功能，使细胞被迫发生线粒体自噬。虽然可以诱导线粒体自噬，但由于具有较大的毒性，并不能在临床应用中发挥作用。

目前并没有发现MCL1抑制剂可以作为线粒体自噬诱导剂，也没有以线粒体自噬诱导剂或者MCL1蛋白抑制剂为靶点的药物治疗炎症和阿尔兹海默症。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种UMI-77作为线粒体自噬诱导剂在制备治疗炎症和神经退行性疾病药物中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种UMI-77作为线粒体自噬诱导剂在制备治疗炎症及神经退行性疾病药物中的应用。

可选地，UMI-77诱导线粒体进入溶酶体发生线粒体自噬。

可选地，炎症为急性肝炎或者炎症性肠病。

可选地，神经退行性疾病为阿尔兹海默症。

本发明还公开了一种人胚肾转化细胞HEK293Tmtkeima稳定细胞株，该细胞株于2019年3月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:C201940。

本发明还公开了一种人胚肾转化细胞HEK293Tmtkeima稳定细胞株的构建方法，包括以下步骤：

1)慢病毒质粒准备：mtkeima序列合成后通过酶切连接方法，连入慢病毒质粒pCDH中形成pCDH-mtkeima，抽提无内毒素的质粒pCDH-mtkeima，慢病毒包装质粒pMD2.0G和psPAX2；

2)慢病毒制备：HEK293T细胞以1*10⁶个/ml密度种于15cm培养皿中，24小时后转染三个质粒pCDH-mtkeima，pMD2.0G和psPAX2，每个质粒10μg；分别在转染后48小时和72小时，收集上清，合并上清并用0.45μm滤膜过滤，以每30ml过滤上清加入7.5ml病毒浓缩溶液的比例，加入适量的浓缩溶液，混匀后，以每隔30分钟颠倒混匀3-5次，共进行4次；4℃放置过夜，第二天4000g，4℃离心20分钟，倒掉上清，用1mlPBS重悬病毒沉淀，-80℃保存；

3)慢病毒感染：HEK293T细胞以5*10⁵个/ml种于10cm培养皿中，24小时后，将制作好的慢病毒从-80℃中取出，充分溶解后滴入细胞培养物中，48小时后观察感染率，感染率大于90％评价为合格，向合格的感染细胞培养物中加入1μg/ml的嘌呤霉素清除未感染的细胞，2-3天后换液传代细胞，扩大培养，冻存细胞，得到人胚肾转化细胞HEK293Tmtkeima稳定细胞株。

与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：

1)本发明通过建立线粒体自噬的高通量筛选模型，通过mtkeima蛋白的特性，可以方便的指征线粒体自噬；筛选到可以温和诱导线粒体自噬的诱导剂UMI-77；UMI-77为MCL1蛋白的特异性抑制剂。