[发明专利]临床细胞制剂用保存液的配方和用途

说明书

本发明公开了一种临床细胞制剂用保存液，其包含以下浓度的组分：各组分的浓度单位均为mg/L。本发明的临床细胞制剂用保存液，含有双重保护成份，从细胞内和细胞外同时保护细胞免受冻存时冰晶的损伤，大大提高了细胞的活率，适应广泛的细胞系保存，同时本发明的临床细胞制剂用保存液中为完全无血清、无蛋白、无DMSO冻存液，避免了临床应用中引入的异种外源成份，更加安全。

技术领域

本发明属于细胞冻存领域，具体地涉及一种临床细胞制剂用保存液和用途。

背景技术

细胞冻存液在保存细胞时，通过冷冻保护剂在冻存过程对细胞进行保护，传统的细胞保护剂仅为细胞内保护剂，细胞受冻存时容易受到冰晶的损伤，细胞活率低，无法有效保护细胞。另外，现有技术中的细胞冻存液通常含有动物源性物质，成分复杂，在临床应用上存在潜在的风险，也增加了污染的几率，同时目前大多数冻存液都含有DMSO(二甲基亚砜)，临床应用存在一定的毒性。

DMSO冷冻保存涉及DMSO相关毒性的风险，特别是在细胞回输治疗应用中。例如，Zambelli等人在1998年评估了移植的冷冻保存细胞的输注相关毒性，并确定移植物中存在的DMSO的量与毒性等级有关。戴维斯等人在1990年发现几乎所有接受冷冻保存的患者都是自体的细胞移植物表现为呼吸困难(83％)，心率降低(98％)和短暂性高血压(96％)，这些都归因于输注DMSO。在1991年，他发现输液相关反应，主要是恶心和寒战，与冷冻保存的骨髓移植有关。此外，在儿科患者中，冷冻保存的骨髓移植后出现较高水平的恶心，呕吐，心律失常和低血压(Okamoto，1993)。

传统的细胞制剂在完成制备后需要在12h内进行回输，超过12h细胞活率下降到80％左右，影响治疗效果，同时细胞制剂无法立即进行细胞无菌、支原体等指标最终判定。

本领域中需要解决上述技术问题的临床细胞制剂用保存液。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种临床细胞制剂用保存液，可用于细胞长期的保存，可应用于细胞库的建立，科研细胞株保存，临床间充质干细胞、单核细胞、免疫细胞以及所涉及到的所有哺乳动物细胞的长期保存，同时冻存液中不含DMSO成分，以及动物源成分，更安全，符合临床需要。

由于大多数淋巴细胞疗法需要定期输注多剂量的细胞，因此DMSO的毒性作用是可以累积的，因此本发明去除了DMSO成分，保证了细胞冻存液在临床应用上更加安全。应用临床细胞制剂用保存液，可以提前冻存细胞制剂，并长期进行保存，冻存前取样进行细胞无菌、支原体等指标检测，待合格后再使用，这样不仅保证了细胞临床质量，而且通过临床级无血清冻存液得到的细胞制剂通过了安全性测试，复苏后活率大于90％，可以直接使用注入人体。

本发明的临床细胞制剂用保存液与传统细胞冻存液使用方法的对比如表1所示。

表1：本发明的临床细胞制剂用保存液与传统细胞冻存液的使用方法比较

本发明的临床细胞制剂用保存液可以2-8℃保存，无需分装；2-8摄氏度保存，无反复冻融环节，即拿即用；冷存过程为直投-80℃冰箱过夜，次日入液氮，操作更为简化。

使用本发明的临床细胞制剂，可以在保持细胞表型的情况下长期冻存，例如在1年、2年或更长时间的冻存。

与传统冻存液相比，使用本发明的临床细胞制剂可以提高冻存细胞的活率，如复苏后的细胞活率测定和复苏后48小时的显微照片确定。

应用本发明的临床细胞制剂，将细胞直接复苏制成细胞制剂，期间无需清洗，在12h内均能保持90％以上的活率。

在一方面，本发明提供了一种临床细胞制剂用保存液，其可以包含以下浓度的组分：

各组分的浓度单位均为mg/L。