[发明专利]一种酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽，包括至少一个钠钾ATP酶β亚基结合域，所述钠钾ATP酶β亚基结合域的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明还公开了该酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽的制备方法以及该酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽的应用。本发明的酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽能够有效被皮肤吸收，对创伤型皮损或角质完整的皮下损伤有优秀的愈合和修复作用。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体地说，是关于一种酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽及其制备方法和应用。

背景技术

纤连蛋白(Fibronectin，FN)是一种大分子糖蛋白，含糖4.5％～9.5％，分子量约为450kd，它广泛存在于血浆、多种细胞表面及细胞基质中，作为一种重要的黏附分子与11种整合素受体结合，在细胞与细胞之间、细胞与基质之间的相互作用中发挥极其重要的功能。大量研究发现，纤连蛋白(FN)参与伤口愈合、组织修复、胚胎分化、免疫反应、肿瘤分化与转移、分娩等过程，与多种疾病有着密切的联系。纤维连接蛋白基质聚合也促进I型胶原沉积，并增强胶原基组织结构。

纤连蛋白是一种蛋白质二聚体，由两个几乎相同的单体通过一对二硫键连接而成。由一对c末端的二硫键相连。每一个纤连蛋白亚基的分子量为230-250kDa，它们由三种重复的模块(modular structures)组成，其中包括：12个纤连蛋白I型重复位点(纤连蛋白I)，2个纤连蛋白II型重复位点(纤连蛋白II)，15-17个纤连蛋白III型重复位点(纤连蛋白III)，还有2个选择性剪接位点(EIIIA和EIIIB)以及1个可变区(V)。以上各种模块组成了纤连蛋白的功能性结构域，其中包括：N末端的70kDa结构域(纤连蛋白I1-9)；120kDa的中心结合结构域(central binding domain，CBD；纤连蛋白III1-12)，以及肝素结合结构域(heparin-binding domain，HepII；纤连蛋白III12-14)。两个纤连蛋白III通过可变剪接生成ED(extradomain)A与B(血浆纤连蛋白没有EDA和EDB，但细胞纤连蛋白含有数量可变的EDA或EDB)。绝大多数的细胞纤连蛋白都含有可变区V。纤连蛋白通过纤连蛋白III10上的精氨酸–甘氨酸–天冬氨酸序列(Arg-Gly-Asp，RGD)识别整合素异二聚体并与之结合，进而影响细胞黏附、迁移等。纤连蛋白分子也具有其他黏附位点，分别与胶原、纤维蛋白、肝素等结合，共同决定了细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的稳定性。

纤连蛋白在医疗、美容以及科研领域有广泛的应用市场，但从人体或动物血液和组织中提取的天然纤连蛋白产量极为有限，成本昂贵，加上纤连蛋白分子太大(由2000多个氨基酸组成，约45万的分子量)，难以被角质结构完整的皮肤吸收。因此限制了FN的市场应用，尤其是美容护肤领域。

发明内容

为了解决上述问题，本发明基于酵母系统获得重组纤连蛋白活性结构。因此，本发明的第一个目的是提供一种酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽，以解决现有的大肠杆菌表达系统获得的产量低、稳定性低的问题。本发明的第二个目的是提供表达载体Chimeric FN。本发明的第三个目的是提供一种酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽的制备方法。本发明的第四个目的是提供一种酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

作为本发明的第一个方面，一种酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽，包括如下氨基酸序列:钠钾ATP酶β亚基结合域，所述钠钾ATP酶β亚基结合域的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

根据本发明，所述酵母发酵小分子重组纤连蛋白肽，还包括如下氨基酸序列:

纤维蛋白结合结构域，所述纤维蛋白结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；

胶原蛋白结合结构域，所述的胶原蛋白结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；