[发明专利]用于检测致病鲍特杆菌的寡核苷酸组合、方法及试剂盒

说明书

本发明涉及分子学生物检测领域，更具体的，涉及鲍特杆菌检测领域。本发明提供了一种寡核苷酸组合在制备检测鲍特杆菌的试剂盒中的用途，其可特异性地检测百日咳鲍特杆菌、副百日咳鲍特杆菌、霍氏鲍特杆菌和支气管败血鲍特杆菌中的一种或更多种，与此同时，本发明还提供了所述寡核苷酸组合、包含所述寡核苷酸组合的试剂盒以及用于鉴定鲍特杆菌的方法。

技术领域

本发明属于分子学生物检测领域，更具体的，属于鲍特杆菌鉴定领域。

背景技术

鲍特杆菌为革兰阴性球杆菌，无芽胞，某些菌株有鞭毛，光滑型菌株有荚膜，是专性需氧型细菌，最适生长温度为35～37℃，最适pH 6.8～7.0，营养要求比较高。

鲍特杆菌包括7个菌种，分别为百日咳鲍特杆菌(B.pertussis)、副百日咳鲍特杆菌(B.parapertussis)、支气管败血鲍特杆菌(B.branchiseptica)、鸟鲍特杆菌(B.avium)、欣氏鲍特杆菌(B.hinzii)、霍氏鲍特杆菌(B.holmesii)和创口鲍特杆菌(B.trematum)。百日咳鲍特杆菌能引起的一种严重急性呼吸道传染病百日咳(pertussis)，传染性较强，人群普遍易感，其中尤以婴幼儿多见，是严重威胁人类健康的主要传染病之一；副百日咳鲍特杆菌是与百日咳鲍特杆菌引起的症状类似，只是相对较轻；霍氏鲍特杆菌是一种能够引起败血症、心肌炎、呼吸道疾病，尤其对于免疫缺陷的患者更易感染(例如：免疫功能不全者、艾滋病患者)。而支气管败血鲍特杆菌在一般情况下感染动物，但少数情况也能感染人，感染之后引起败血症、脑膜炎、肺炎等，而其易与其它细菌感染的症状混淆，因此，临床上容易遗漏支气管败血鲍特杆菌的检测。

目前，主要利用细菌学、血清学检测以及PCR技术来对鲍特杆菌进行检测。细菌学检测实验周期太长，灵敏度低，只有15％～30％，方法也不易标准化；因此，其仅适合病程早期的诊断，远不能满足临床需要。血清学检测灵敏度不高，存在一定的假阳性且操作比较繁琐，对操作人员要求较高。

PCR检测，特别是荧光定量PCR检测是近年来发展迅速的一种核酸检测技术，其特异性好，灵敏度高，且实验周期短。中国专利公开CN 109153699A披露了一种检测鲍特杆菌的方法，通过三对引物实现了对百日咳鲍特杆菌、副百日咳鲍特杆菌和霍氏鲍特杆菌的检测。由于需要使用三对引物，检测的操作更加复杂且不可避免地增加了检测成本。另外，美国专利公开US2010/0221715A1也披露了一种检测鲍特杆菌的组合物，其包括两对引物，能够检测百日咳鲍特杆菌、副百日咳鲍特杆菌和霍氏鲍特杆菌，但无法检测出其他鲍特杆菌，如支气管败血鲍特杆菌，的存在。

因此，现有技术存在对用尽量少的引物检测尽量多的鲍特杆菌的高灵敏度试剂的强烈需求。

发明内容

有鉴于此，在第一方面，本发明提供了一种寡核苷酸组合在制备检测鲍特杆菌的试剂盒中的用途，所述鲍特杆菌为选自百日咳鲍特杆菌、副百日咳鲍特杆菌、霍氏鲍特杆菌和支气管败血鲍特杆菌中的一种或更多种，所述寡核苷酸组合包括：

第一上游引物、第一下游引物、第一探针、第二上游引物、第二下游引物、和第二探针。

在一个实施方式中，第一上游引物具有SEQ ID NO:1所示的序列，第一下游引物具有SEQ ID NO:2所示的序列，第一探针具有SEQ ID NO:3所示的序列，第二上游引物具有SEQID NO:4所示的序列，第二下游引物具有SEQ ID NO:5所示的序列，第二探针具有SEQ IDNO:6所示的序列。

在另一个实施方式中，第一上游引物具有SEQ ID NO:10所示的序列，第一下游引物具有SEQ ID NO:11所示的序列，第一探针具有SEQ ID NO:12所示的序列，第二上游引物具有SEQ ID NO:4所示的序列，第二下游引物具有SEQ ID NO:13所示的序列，第二探针具有SEQ ID NO:6所示的序列。