[发明专利]粪便DNA提取试剂盒

权利要求书

1.一种粪便DNA提取保存液，其特征在于，该保存液包括0.20~0.30M EDTA，0.2~0.8%丙氨酸， 20~30%乙醇，0.2~0.8%十二烷基硫酸钠，1.0~5.0%聚乙烯吡咯烷酮，pH 10.0~11.0；上述的百分比为质量百分比。

2.根据权利要求1所述的保存液，其特征在于，该保存液包括0.25M EDTA，0.5%丙氨酸，25%乙醇，0.5%十二烷基硫酸钠，2.0%聚乙烯吡咯烷酮，pH 10.5；上述的百分比为质量百分比。

3.一种粪便DNA提取保存管，该保存管含权利要求1或2所述的保存液。

4.一种粪便DNA提取试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括粪便保存液、裂解液、结合缓冲液、洗涤液和洗脱液，所述的粪便保存液为权利要求1或2所述的保存液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，裂解液和结合缓冲液含有：0.1M Tris-HCl，15mM EDTA，1M NaCl，3M GuSCN，1.0%十二烷基硫酸钠，20%异丙醇，pH 8.9；所述的洗涤液包括洗涤液I和洗涤液II，洗涤液I含有：3 M GuHCl，10mM Tris，50%乙醇，pH 8.0；洗涤液II包括：10mM Tris，80%乙醇，pH 7.5；洗脱液含有：10mM Tris，0.1 mM EDTA ，pH 9.0。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，裂解结合液含有：0.1M Tris-HCl，15mMEDTA，1M NaCl，3M GuSCN，1.0%十二烷基-N-甜菜碱，20%的异丙醇，pH 8.9；所述的洗涤液含有：3 M GuHCl，10mM Tris，50%乙醇，碳酸氢钠35mM,pH 9.0；洗脱液含有：10mM Tris，0.1mM EDTA ，pH 9.0。

7.权利要求4或5或6所述的试剂盒提取粪便DNA的方法。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，该方法采用的权利要求5所述的试剂盒，包括以下的步骤：

1）含1ml粪便保存液离心管内中加入0.2g粪便，震荡混匀；

2）将离心管加热70℃涡旋震荡20min；

3）将离心管12000 rpm离心5min，弃上清留沉淀；

4）沉淀中加入1ml的裂解液，10ul Enhancer，15ul Inhibitor Remover，涡旋震荡为悬浮液；

5）将离心管加热55℃震荡20min；

6）将离心管12000 rpm离心取上清， 10ul磁珠，65℃震荡5min；

7）加入洗涤液I洗两次；

8）加入洗涤液II洗两次；

9）加入洗脱液洗脱，60℃温度下震荡5分钟，然后将离心管置于磁力分离架上2分钟，用枪头将上清液移至另一干净离心管中；回收得到的DNA，保存于-20℃。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，该方法采用的权利要求6所述的试剂盒，包括以下的步骤：

1）含1ml粪便保存液离心管内中加入0.2g粪便，震荡混匀；

2）将离心管加热70℃涡旋震荡20min；

3）将离心管12000 rpm离心5min，弃上清留沉淀；

4）沉淀中加入1ml的裂解液，10ul Enhancer，15ul Inhibitor Remover，涡旋震荡为悬浮液；

5）将离心管加热55℃震荡20min；

6）将离心管12000 rpm离心取上清， 10ul磁珠，65℃震荡5min；

7）将离心管从磁力分离架中取出，加入1000ul 洗涤液，涡旋震荡离心管5-10次，使磁珠充分混匀，然后将离心管置于磁力分离架上2分钟，使得管内磁珠完全被吸附，小心地使用移液枪在不触动沉淀的情况下移走全部上清液；

8）加入洗脱液洗脱，60℃温度下震荡5分钟，然后将离心管置于磁力分离架上2分钟，用枪头将上清液移至另一干净离心管中；回收得到的DNA，保存于-20℃。