[发明专利]一种高产蛋白质小球藻的培养方法

权利要求书

1.一种高产蛋白质小球藻的培养方法，其特征在于，所述方法包括：

第一阶段的培养：将索罗金小球藻Chlorella sorokiniana接种到发酵罐中培养，培养过程中使用的基础培养基和补料培养基均以铵盐为氮源，以葡萄糖为碳源，且基础培养基中葡萄糖的初始浓度为20-30g/L；基础培养基中碳氮质量比为10:1-40:1，而补料培养基中碳氮质量比为基础培养基中碳氮比的10-20倍；

在培养过程中，保持发酵温度为28-30℃、溶氧为35-45%、pH值在6.5±0.2；

培养过程中，实时监测培养体系的pH值，用补加氨水的方式调节培养体系的pH值在6.5±0.2并同时作为氮源补充；

在培养过程中，当基础培养基中葡萄糖浓度首次降至3-4 g/L时开始流加补料培养基并实时监测发酵罐内葡萄糖的浓度，根据葡萄糖浓度的变化实时调节流加补料培养基的速度，使流加速度满足整个培养周期内培养体系中葡萄糖的浓度控制在5 g/L±40%；

第二阶段的培养：在上述培养过程中实时监测索罗金小球藻的干重和蛋白质含量，当检测到索罗金小球藻的干重≥200g/L时，将发酵培养获得的小球藻经稀释后转BG11培养基进行光自养培养一段时间，当索罗金小球藻内蛋白质含量达到40%以上时，收获索罗金小球藻。

2.根据权利要求1所述的一种高产蛋白质小球藻的培养方法，其特征在于：所述基础培养基中葡萄糖的初始浓度为30g/L。

3.根据权利要求1所述的一种高产蛋白质小球藻的培养方法，其特征在于：所述补料培养基中碳氮质量比为基础培养基中碳氮比的20倍。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种高产蛋白质小球藻的培养方法，其特征在于：所述异养培养的温度为30℃，搅拌速度和溶解氧偶联控制，溶解氧设定为40%，且培养过程中采用补充氨水的方式调节pH和补充氮源，使pH恒定在6.5±0.2。

5.根据权利要求1-3任一项所述的一种高产蛋白质小球藻的培养方法，其特征在于：所述铵盐为氯化铵。

6.根据权利要求1所述的一种高产蛋白质小球藻的培养方法，其特征在于：所述流加补料培养基的速度满足使培养体系中葡萄糖的浓度保持在5 g/L±20%。

7.根据权利要求1所述的一种高产蛋白质小球藻的培养方法，其特征在于：在培养过程中，由计算机根据培养体系的实时监测结果，控制速度可调的蠕动泵流加氨水和补料培养基，以控制和稳定培养体系的pH和葡萄糖浓度。

8.根据权利要求1-3任一项所述的一种高产蛋白质小球藻的培养方法，其特征在于：所述第二阶段培养中，稀释后光自养培养的初始接种量为0.15~0.25g/L，优选为0.2 g/L；自养培养基为BG11培养基，光照强度为80-120μmol m^-2 s^-1，培养温度为20±0.5℃，当索罗金小球藻内蛋白质含量达到40%以上时进行收获。