[发明专利]盐芥TsHKT1；3启动子的克隆与应用

权利要求书

1.一种盐芥根特异性表达基因TsHKT1;3启动子，所述启动子核苷酸序列如SEQ.ID.NO:2所示。

2.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为在植物GUS表达载体pCambia1305.1的酶切位点插入如权利要求1所述的TsHKT1;3启动子得到的重组质粒；在所述重组表达质粒中，TsHKT1;3启动子连接在GUS基因的上游；

所述酶切位点为HindⅢ和NcoⅠ；

所述插入使用的扩增引物为序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所述的引物对。

3.一种如权利要求2所述的重组表达载体的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、以TsHKT1;3启动子克隆载体为模板，采用序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所述的引物对，利用高保真酶进行PCR扩增；

S2、将PCR扩增片段和载体pCambia1305.1利用HindⅢ和NcoⅠ酶切，利用T4连接酶连接；

S3、连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α，并进行菌落PCR验证和测序验证，测序正确后再提取该载体，即得所述重组表达载体；

步骤S1中，所述TsHKT1;3启动子克隆载体是通过包括如下步骤的方法制备而得的：

A1、利用CTAB法提取盐芥整株DNA；

A2、以所述DNA为模板，采用序列如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所述的引物对，利用高保真酶进行PCR扩增；

A3、PCR扩增片段连接至pMD19-T中，转化大肠杆菌感受态DH5α，并进行菌落PCR验证和测序验证，测序正确后再提取该载体，即得所述TsHKT1;3启动子克隆载体。

4.一种如权利要求2所述的重组表达载体的应用，其特征在于：将所述重组表达载体转入农杆菌GV3101中，利用花序侵染法侵染拟南芥植株；所收种子经多代潮霉素筛选，最终收获纯合株系。

5.一种如权利要求2所述的重组表达载体的应用，其特征在于：将所述重组表达载体转入拟南芥，盐胁迫处理观察其GUS染色结果。