[发明专利]NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途

说明书

本发明提供了一种NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途，属于生物医药研究领域。本发明通过研究NUPR1在肌层浸润性膀胱癌中的表达水平，发现其与肌层浸润性膀胱癌肿瘤细胞的生长、增殖、分化、转移密切相关。通过使NUPR1基因沉默表达，可以显著抑制肌层浸润性膀胱癌肿瘤细胞的生长。本发明通过序列设计和大量实验验证，获得了一条特异性shRNA序列，采用慢病毒包装后，使NUPR1的表达降低95％～99％。

技术领域

本发明涉及生物医药研究领域，尤其是涉及一种NUPR1抑制剂及其在制备膀胱癌治疗药物中的用途。

背景技术

NUPR1(Nuclear protein-1)分子主要定位在细胞核上，是一个含有82个氨基酸的无稳定性二级机构的转录调节因子。剪切后形成两个亚基，a型和b型。1997年，在最初研究大鼠胰腺炎胰腺损伤时发现NUPR1基因，由于它的相对分子量为8872.7Da，因此也被命名为p8。NUPR1具有转录活性，并已证实在多种肿瘤的发生、发展和转移过程中具有重要作用。

研究表明，NUPR1与多种非肿瘤性疾病过程有关，如胰腺炎、糖尿病及其并发症、心肌病变、神经系统的应激性损伤等。在肿瘤方面，NUPR1参与了乳腺癌、胰腺癌、甲状腺乳头状癌等肿瘤的发展与转移。针对NUPR1的研究为恶性肿瘤提供了一个新的方向和依据。

目前对于NUPR1应用于肿瘤治疗的研究方法包括基因敲除、基因沉默等。李俊进行了NUPR1基因敲低后的U251和U87细胞检测(Nupr1调控非小细胞肺癌细胞迁移、凋亡机制的研究，大连医科大学博士论文，2017年3月)；邓跃林等检测了NUPR1基因沉默后非小细胞肺癌细胞A549细胞体外迁移、侵袭能力的变化(Nupr1调控非小细胞肺癌细胞迁移、凋亡机制的研究，现代生物医学进展，2017年第19期)。对于NUPR1的研究和相关产品的开发可以促进肿瘤治疗的发展。

膀胱癌(bladder cancer)在全世界恶性肿瘤中排在第十位，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤。近年来，我国膀胱癌的发病率和死亡率呈上升趋势。膀胱浅表性尿路上皮癌(NMIBC)通过早期发现，后续行经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)及术后规律膀胱化疗药物灌注治疗，预后较好。而对于肌层浸润性膀胱癌(MIBC)，因较早出现疾病进展、术后复发及转移，且对辅助放化疗不敏感或易出现耐药性，术后5年存活率只有47％。

CN108498800A提供了一种COPB2抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途中，其中COPB2慢病毒转染膀胱癌6537细胞干扰效率为70％；通过定量PCR与Western blot检测，COPB2干扰效率为60-75％。由于临床治疗情况复杂，病例体质差异很大，因此这一效率还无法达到临床的治疗要求。

《沉默NUPR1对人多发性骨髓瘤细胞自噬的影响及机制研究》(李星欣，重庆医科大学硕士学位论文，2018年5月)公开了一组最佳干扰序列为：5’-CCAAGCTGCAGAATTCAGA-3’，对照病毒序列为5’-TTCTCCGAACGTGT CACGT-3’。结果表明NUPR1-shRNA慢病毒转染U266和PRMI8226的转染效率为90％。但是该干扰序列对于肿瘤细胞的干扰效率并不高，并且也不适于与膀胱癌肿瘤细胞的干扰。

因此，需要开发一种干扰效率更高、靶向作用于肌层浸润性膀胱癌肿瘤细胞的新型药物。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本申请提供了一种NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种NUPR1抑制剂在制备膀胱癌治疗药物中的用途，所述NUPR1抑制剂为含有shRNA序列的干扰核酸构建体；所述shRNA序列为：

5’-AAGAAAGCTACAGAAGAAACT-3’。

进一步的，所述干扰核酸构建体为干扰慢病毒载体。所述干扰慢病毒载体为pFU-GW-009。